应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » WB上样量不同导致结果不同，哪一次的结果可信呢？
51/1返回列表
查看: 9571  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

herjasmine

新虫 (初入文坛)

[求助] WB上样量不同导致结果不同，哪一次的结果可信呢？

最近几次WB做下来目的蛋白control和给药组都没有差异（条带清晰，蛋白内参颜色稍淡）。然后有老师建议减少上样量。说上样量太大，抗体饱和后可能导致怎么做都没有差异。于是我降低上样量做了一次，果然又有差异了。正好另外一个师姐在做其他蛋白，因为我所做的目的蛋白转膜后也在她那张膜上。她和我用的是同一批样品。所以我就请她把那张膜剪开，顺便把我要做的膜也孵上了抗体看看。然后她的上样量介于我第一次和第二次之间。抗体浓度比第一次降低了一些。做出来结果又没有差异了。我被搞晕了。到底哪一次的结果才可信啊？而且条带都比较清楚。而有差异的也是比较明显的那种。你们遇到这种情况怎么办呢？重复几次？要是每次重复结果都不一样那又怎么办呢？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白质生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-11-08 10:56:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

herjasmine

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-09 09:27:31
一定浓度的抗体（任何稀释度下）都有其线性工作范围，超过这个范围的信号可能饱和或者衰减很快甚至无法检测到。所以，你需要对标准品或者对照样品的不同上样量跑胶做WB。你给药组的样品的信号强度需要落在你检测线性 ...

那可以说我做出来有差异那次的是可信的吗？因为3次里我做的那次上样量是最小的。而抗体浓度和第一次一样，又比第二次高。可不可以这样认为呢（当然还需要再次实验验证）？另外，如果我那次的条件做出来结果是有差异的，那我是不是就可以不用再做线性梯度了？谢谢！
赞一下 回复此楼
4楼2013-11-11 09:17:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

yipan

铜虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你是自己配胶还是买的成品预制胶？成品预制胶没有重复性差异，自己配胶的话多少会出现差异性。另外MARK标记每次应固定在一个位置，方便对照。上样量可以多重复几次，多做几个批次，如果时间和样本足够的话。这样就可以得到准确的结果。
赞一下 回复此楼
2楼2013-11-08 14:19:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一定浓度的抗体（任何稀释度下）都有其线性工作范围，超过这个范围的信号可能饱和或者衰减很快甚至无法检测到。所以，你需要对标准品或者对照样品的不同上样量跑胶做WB。你给药组的样品的信号强度需要落在你检测线性范围内。然后根据对照组或者标准品做的线性梯度来估算给药组的蛋白表达量。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2013-11-09 09:27:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你用别的费WB蛋白质-蛋白质相互作用方法检测一下，看看与那一次WB的实验结果相同。最简单的方法：免疫共沉淀,pull down.
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2013-11-11 10:26:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0703化学调剂 +4 18889395102 2026-03-18 4/200 2026-03-19 16:13 by 30660438
[考研] 085601材料工程专硕求调剂 +10 慕寒mio 2026-03-16 10/500 2026-03-19 15:26 by 丁丁*
[考研] 266求调剂 +5 阳阳哇塞 2026-03-14 10/500 2026-03-19 15:08 by 阳阳哇塞
[考研] 281求调剂（0805） +9 烟汐忆海 2026-03-16 19/950 2026-03-19 11:42 by laoshidan
[考研] 材料考研调剂 +3 xwt。 2026-03-19 3/150 2026-03-19 11:22 by w沐阳w
[考研] 一志愿天大材料与化工（085600）总分338 +5 蔡大美女 2026-03-13 5/250 2026-03-19 10:44 by 是小刘呀～
[考研] 材料工程专硕调剂 +5 204818@lcx 2026-03-17 6/300 2026-03-18 22:55 by 204818@lcx
[考研] 344求调剂 +6 knight344 2026-03-16 7/350 2026-03-18 20:13 by walc
[考研] 一志愿武理材料305分求调剂 +5 想上岸的鲤鱼 2026-03-18 6/300 2026-03-18 17:53 by 无际的草原
[考研] 26调剂/材料/英一数二/总分289/已过A区线 +7 步川酷紫123 2026-03-13 7/350 2026-03-18 17:12 by 尽舜尧1
[考研] 085600材料与化工 +5 安全上岸！ 2026-03-16 5/250 2026-03-18 15:33 by cmz0325
[考研] 311求调剂 +6 26研0 2026-03-15 6/300 2026-03-18 14:43 by haxia
[考研] 材料专硕306英一数二 +10 z1z2z3879 2026-03-16 13/650 2026-03-18 14:20 by 007_lilei
[考研] 265求调剂 +3 梁梁校校 2026-03-17 3/150 2026-03-18 09:12 by zhukairuo
[考研] 材料专硕326求调剂 +6 墨煜姒莘 2026-03-15 7/350 2026-03-17 17:10 by ruiyingmiao
[论文投稿] 有没有大佬发小论文能带我个二作 +3 增锐漏人 2026-03-17 4/200 2026-03-17 09:26 by xs74101122
[考研] 药学383 求调剂 +3 药学chy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 20:51 by 元子^0^
[考研] 一志愿华中师范071000，325求调剂 +6 RuitingC 2026-03-12 6/300 2026-03-16 14:50 by 可淡不可忘
[考研] 085601材料工程315分求调剂 +3 yang_0104 2026-03-15 3/150 2026-03-15 10:58 by peike
[考研] 295求调剂 +3 小匕仔汁 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:17 by vgtyfty
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭