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萝莉胖

铜虫 (小有名气)

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10楼: Originally posted by 小熊笨笨run at 2013-11-12 18:32:36
你好!可以展示下你用BSA标曲测所得的原始数据吗?我现在按你所提供的得到的也不是你所说的数值,是不是你取1ml的待测液也进行了一定的稀释?你想到的蛋白状态是否影响测浓度的准确性,这点我没考虑过,但觉得不是 ...

用此标准曲线,测定上述BR溶液浓度,取1ml待测液,与4ml考马斯染液作用10分钟,取3ml测OD595=0.474。根据BSA标曲公式y=0.048x-0.003,已知y=0.474,x=9.9375ug/ml,因为待测液是1ml,所以乘以5,得浓度为9.9375×5=49.6875,近似49.69ug/ml。以上,我想这个应该没啥问题,我没有算错吧。1ml的待测液没有再进行稀释,就是配的1ml未知浓度的蛋白待测样品。
我是自己的神
11楼2013-11-14 09:19:05
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小熊笨笨run

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
11楼: Originally posted by 萝莉胖 at 2013-11-14 09:19:05
用此标准曲线,测定上述BR溶液浓度,取1ml待测液,与4ml考马斯染液作用10分钟,取3ml测OD595=0.474。根据BSA标曲公式y=0.048x-0.003,已知y=0.474,x=9.9375ug/ml,因为待测液是1ml,所以乘以5,得浓度为9.9375×5 ...

恩,你没算错,我算了下得的值是这个,我也不懂什么原因为啥有这么大差别了。
12楼2013-11-14 09:56:16
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hl16010921

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
1.考马斯亮蓝原理在于染料与蛋白形成复合物,而膜蛋白用这种方法显然是测不准的。2.280nm光吸收,依赖氨基酸组成,另外蛋白的高级结构也有影响(芳香氨基酸完全暴露时吸收最大)。BSA和待测蛋白的氨基酸组成差异太大也不行。3.如果550nm的摩尔吸光系数接近BR,分子量相对关系确定,可以用BR做标准曲线,否则,没什么好办法了。膜蛋白不好做准确定量,和BSA差别太大了
13楼2013-11-14 13:26:12
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Sean2010

捐助贵宾 (著名写手)

Bradford Assay?
自强弘毅,求是拓新
14楼2013-11-28 22:28:25
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水也tink

银虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
居然没有看到你的空白标定,是不是考虑将待测液OD值减去空白,带入曲线,并标曲与待测液的混液比例需要一致才行
15楼2014-07-11 16:15:12
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