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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » BSA做考马斯亮蓝标准曲线的问题
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萝莉胖

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 小熊笨笨run at 2013-11-12 18:32:36
你好！可以展示下你用BSA标曲测所得的原始数据吗？我现在按你所提供的得到的也不是你所说的数值，是不是你取1ml的待测液也进行了一定的稀释？你想到的蛋白状态是否影响测浓度的准确性，这点我没考虑过，但觉得不是 ...

用此标准曲线，测定上述BR溶液浓度，取1ml待测液，与4ml考马斯染液作用10分钟，取3ml测OD595=0.474。根据BSA标曲公式y=0.048x-0.003，已知y=0.474，x=9.9375ug/ml，因为待测液是1ml，所以乘以5，得浓度为9.9375×5=49.6875，近似49.69ug/ml。以上，我想这个应该没啥问题，我没有算错吧。1ml的待测液没有再进行稀释，就是配的1ml未知浓度的蛋白待测样品。
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我是自己的神
11楼2013-11-14 09:19:05
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小熊笨笨run

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
11楼: Originally posted by 萝莉胖 at 2013-11-14 09:19:05
用此标准曲线，测定上述BR溶液浓度，取1ml待测液，与4ml考马斯染液作用10分钟，取3ml测OD595=0.474。根据BSA标曲公式y=0.048x-0.003，已知y=0.474，x=9.9375ug/ml，因为待测液是1ml，所以乘以5，得浓度为9.9375×5 ...

恩，你没算错，我算了下得的值是这个，我也不懂什么原因为啥有这么大差别了。
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12楼2013-11-14 09:56:16
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hl16010921

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1.考马斯亮蓝原理在于染料与蛋白形成复合物，而膜蛋白用这种方法显然是测不准的。2.280nm光吸收，依赖氨基酸组成，另外蛋白的高级结构也有影响（芳香氨基酸完全暴露时吸收最大）。BSA和待测蛋白的氨基酸组成差异太大也不行。3.如果550nm的摩尔吸光系数接近BR，分子量相对关系确定，可以用BR做标准曲线，否则，没什么好办法了。膜蛋白不好做准确定量，和BSA差别太大了
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13楼2013-11-14 13:26:12
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Sean2010

捐助贵宾 (著名写手)
Bradford Assay?
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自强弘毅，求是拓新
14楼2013-11-28 22:28:25
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水也tink

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
居然没有看到你的空白标定，是不是考虑将待测液OD值减去空白，带入曲线，并标曲与待测液的混液比例需要一致才行
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15楼2014-07-11 16:15:12
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