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samuel01

金虫 (正式写手)

[求助] HPLC问题

各位朋友，有个问题想向您请教一下，样品和氧化样品在一个位置出峰，并且用正相和反相柱分离都有些不好解决的问题，样品的最大吸收在201nm,氧化产品的吸收在230nm, 我定含量的时候，能用210nm作为样品的含量测定，230nm用做氧化产物的含量测定吗？这样做有先例么，科学么？多谢！
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泛舟东海 跃马昆仑
1楼 2007-12-13 08:13:56
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林夕983

木虫 (小有名气)
呵呵，路过！
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2楼2007-12-13 08:16:23
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wjj123

银虫 (正式写手)
觉得这样不可以
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3楼2007-12-13 08:26:38
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schhill

银虫 (小有名气)
★
samuel01(金币+1,VIP+0):谢谢,只是还不太明白
相同的物质在不同波长下的吸收响应值是不一致的，更不要说不同的物质了。而且两者还会有一些重叠，因为230吸收的物质在201也有可能由吸收
不过我想你可以粗略的测一下相对含量，具体方法是：
你在进同一针样是采用双波长吸收检测，分别是201nm和230nm，看看二者是否能分开，如果不能，首先优化条件使两个出峰位置相隔开来
之后配制几个二者的混合溶液做标准溶液，再来用相同的方法建立一条曲线，然后从中求出你样品的相对含量，可能不很精确，但已经不会差太多了
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4楼2007-12-13 08:46:00
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samuel01

金虫 (正式写手)
谢谢大家! 我的样品是PI磷脂,可能本身就是个混合物,脂肪酸链的长短不一样,氧化就是在这些脂肪链上多个羟基或者过氧基,但整体来看,极性头部一样,所以正相柱好象分不开.
用反相柱分,又分出来6-7个峰,不好确定哪个是氧化的,哪个是样品,难道201比230高的就说它是样品峰吗,而且我们还不想PI分那么多峰,只要一类的就好了,但不用反相,它和氧化物又不好分,这种情况怎么办啊?
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泛舟东海 跃马昆仑
5楼2007-12-13 11:07:17
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samuel01

金虫 (正式写手)
有什么办法可以测含量吗?我的样品不是合成的,过氧化物的含量测定有什么科学的方法吗?谢谢了
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泛舟东海 跃马昆仑
6楼2007-12-13 12:54:42
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wuhuajiang

捐助贵宾 (著名写手)

单身家族之lucky
★ ★
samuel01(金币+2,VIP+0):恩,有制备的标准品,现在基本上能确定样品峰的位置
我觉得先纯化下样品吧，先确定原料的出峰位置，氧化物相对来说就比较方便了
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7楼2007-12-14 10:51:23
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samuel01

金虫 (正式写手)
我的样品是提取的,只需要测PI这类(极性头部相同,脂肪链长短不同)的含量就可以了,可是氧化产品和产品是分开了,可是样品本身也分了好几个峰.

我们正相分离的时候,单进PI,图上就一个峰,可是发现样品的含量由95%变为20%了,在图上只又看不到多出的杂峰,因此要说明少的东西都跑哪去了吧,样品和过氧化物的结构太相近,只是在侧链的脂肪链上多个过氧基团,就得用反相来分吧?

所以不知道这种情况应该怎么处理了?请大家帮忙想想办法,谢谢!
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泛舟东海 跃马昆仑
8楼2007-12-14 13:01:02
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leonumn

铁杆木虫 (著名写手)
★
samuel01(金币+1,VIP+0):谢谢,双波长一个内标怎么做呢,能具体一点么,我只有样品的标准品
如果两者都有标准品，　可用内标法测定二者的含量．　双波长一个内标．
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9楼2007-12-14 13:19:49
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lhw718

金虫 (小有名气)
我觉得你还是先做一个全波长扫描吧，确定一下两个的波长，再往下分析可能更好一些
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10楼2007-12-14 14:01:46
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