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samuel01

金虫 (正式写手)

[求助] HPLC问题

各位朋友,有个问题想向您请教一下,样品和氧化样品在一个位置出峰,并且用正相和反相柱分离都有些不好解决的问题,样品的最大吸收在201nm,氧化产品的吸收在230nm, 我定含量的时候,能用210nm作为样品的含量测定,230nm用做氧化产物的含量测定吗?这样做有先例么,科学么?多谢!

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泛舟东海 跃马昆仑
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samuel01

金虫 (正式写手)

我的样品是提取的,只需要测PI这类(极性头部相同,脂肪链长短不同)的含量就可以了,可是氧化产品和产品是分开了,可是样品本身也分了好几个峰.

我们正相分离的时候,单进PI,图上就一个峰,可是发现样品的含量由95%变为20%了,在图上只又看不到多出的杂峰,因此要说明少的东西都跑哪去了吧,样品和过氧化物的结构太相近,只是在侧链的脂肪链上多个过氧基团,就得用反相来分吧?

所以不知道这种情况应该怎么处理了?请大家帮忙想想办法,谢谢!
泛舟东海 跃马昆仑
8楼2007-12-14 13:01:02
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schhill

银虫 (小有名气)


samuel01(金币+1,VIP+0):谢谢,只是还不太明白
相同的物质在不同波长下的吸收响应值是不一致的,更不要说不同的物质了。而且两者还会有一些重叠,因为230吸收的物质在201也有可能由吸收
不过我想你可以粗略的测一下相对含量,具体方法是:
你在进同一针样是采用双波长吸收检测,分别是201nm和230nm,看看二者是否能分开,如果不能,首先优化条件使两个出峰位置相隔开来
之后配制几个二者的混合溶液做标准溶液,再来用相同的方法建立一条曲线,然后从中求出你样品的相对含量,可能不很精确,但已经不会差太多了
4楼2007-12-13 08:46:00
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samuel01

金虫 (正式写手)

谢谢大家! 我的样品是PI磷脂,可能本身就是个混合物,脂肪酸链的长短不一样,氧化就是在这些脂肪链上多个羟基或者过氧基,但整体来看,极性头部一样,所以正相柱好象分不开.
用反相柱分,又分出来6-7个峰,不好确定哪个是氧化的,哪个是样品,难道201比230高的就说它是样品峰吗,而且我们还不想PI分那么多峰,只要一类的就好了,但不用反相,它和氧化物又不好分,这种情况怎么办啊?
泛舟东海 跃马昆仑
5楼2007-12-13 11:07:17
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samuel01

金虫 (正式写手)

有什么办法可以测含量吗?我的样品不是合成的,过氧化物的含量测定有什么科学的方法吗?谢谢了
泛舟东海 跃马昆仑
6楼2007-12-13 12:54:42
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