应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 细胞信号通路，WB相关问题
381/4返回列表1234下一页
查看: 2904  |  回复: 37
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

nininini1

新虫 (初入文坛)

[求助] 细胞信号通路，WB相关问题

我现在在做益生菌的胞外蛋白对MAPK和PI3K-AKT信号通路的影响，我想做如下内容，不知道可不可以，请大师们指点：第一部分，先用MTT法来做胞外蛋白对HT-29细胞的增殖抑制作用,（包括时间和浓度的依赖性）；第二部分，分别检测两条通路的关键蛋白：MAPK中的JNK，ERK，p38蛋白（有一个问题：检测这三种蛋白还是检测磷酸化的这三种蛋白（即p-JNK，p-ERK，p-p38）？ 有什么区别和意义吗？）PI3K-AKt的通路：我就检测PI3K和p-AKT这连个蛋白（查了很多文献都是检测这两种蛋白）。
求大神指点
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2013-11-04 19:16:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

xiangyu9356

至尊木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
nininini1: 金币+1, ★★★★★最佳答案 2013-11-15 17:34:52
引用回帖:
10楼: Originally posted by nininini1 at 2013-11-14 20:56:52
不好意思，问错了不是一抗，二抗去除液，是用一抗孵育完，用TBST洗一下膜，这个tbst里面用加BSA或脱脂奶粉吗？...

洗一抗、二抗的时候，TBST不需要再加脱脂奶粉或者BSA。
赞一下(2人) 回复此楼
满堂花醉三千客，更无一人是知音。
12楼2013-11-15 10:00:10
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangyu9356

至尊木虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by nininini1 at 2013-11-15 18:20:38
还想问一下：我最近想买抗体了，下面有几种抗体，不知道怎么选择，磷酸位点怎么选择，文献中Ser473的很多，

QQ截图20131115175839.png
...

应该选Ser473位点的。另外如果有条件最好选CST的XP版的，我们实验室一直在用CST 货号应该是4060.
另外对于贵师兄的western结果图，严格说来是不确切的，一般都是磷酸化形式与总的相比（比如应该是p-AKT/AKT），而不是磷酸化形式与内参的比值。
请慎重考虑，祝好！
赞一下(2人) 回复此楼
满堂花醉三千客，更无一人是知音。
17楼2013-11-16 11:12:45
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
nininini1: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-11-14 16:20:06
引用回帖:
3楼: Originally posted by nininini1 at 2013-11-05 20:24:24
我只检测磷酸化的这三种蛋白（即p-JNK，p-ERK，p-p38）可以吗？

当然不行。蛋白质磷酸化与蛋白质相互作用不是一回事。你的实验就是蛋白质-蛋白质相互作用，不用WB同样可以。红外、紫外、CD、NMR、核磁共振、免疫共沉淀、酵母双杂交等试验方法很多。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2013-11-06 11:45:20
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangyu9356

至尊木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
nininini1: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-11-14 13:03:25
引用回帖:
6楼: Originally posted by nininini1 at 2013-11-12 12:54:51
谢谢你的回复，我还想问一下，我用提取磷酸化蛋白试剂盒提取全蛋白，提取的蛋白可以做全蛋白的WB吗？（例如我用磷酸化蛋白试剂盒提取全蛋白用WB方法测p-p38的表达情况，还可以用这样提取的蛋白测p38蛋白的表达吗？ ...

可以。提取磷酸化蛋白试剂盒是在提取过程中对磷酸化的蛋白有特殊保护，对总蛋白影响不大。
赞一下(1人) 回复此楼
满堂花醉三千客，更无一人是知音。
7楼2013-11-13 09:28:35
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

nininini1

新虫 (初入文坛)
自己顶一下
回复此楼
2楼2013-11-04 19:17:22
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nininini1

新虫 (初入文坛)
我只检测磷酸化的这三种蛋白（即p-JNK，p-ERK，p-p38）可以吗？
赞一下 回复此楼
3楼2013-11-05 20:24:24
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangyu9356

至尊木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
nininini1: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-11-12 12:55:12
引用回帖:
2楼: Originally posted by nininini1 at 2013-11-04 19:17:22
自己顶一下

一般都是要检测的。严格说来，这几种蛋白（包括AKT）都是磷酸化后才能反映其活性变化，所以最后是磷酸化形式与Total的比值来做统计的。
赞一下 回复此楼
满堂花醉三千客，更无一人是知音。
4楼2013-11-06 10:41:46
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nininini1

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xiangyu9356 at 2013-11-06 10:41:46
一般都是要检测的。严格说来，这几种蛋白（包括AKT）都是磷酸化后才能反映其活性变化，所以最后是磷酸化形式与Total的比值来做统计的。...

谢谢你的回复，我还想问一下，我用提取磷酸化蛋白试剂盒提取全蛋白，提取的蛋白可以做全蛋白的WB吗？（例如我用磷酸化蛋白试剂盒提取全蛋白用WB方法测p-p38的表达情况，还可以用这样提取的蛋白测p38蛋白的表达吗？）
赞一下 回复此楼
6楼2013-11-12 12:54:51
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nininini1

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by xiangyu9356 at 2013-11-13 09:28:35
可以。提取磷酸化蛋白试剂盒是在提取过程中对磷酸化的蛋白有特殊保护，对总蛋白影响不大。...

还想请教一个问题，我做磷酸化蛋白的Wb时，一抗，二抗用什么稀释（是用TBST稀释，TBST中要加BSA或者脱脂奶粉吗？）一抗，二抗的去除液是用TBST吗，里面用加BSA或者脱脂奶粉吗？
赞一下 回复此楼
8楼2013-11-14 16:14:46
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nininini1

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-11-06 11:45:20
当然不行。蛋白质磷酸化与蛋白质相互作用不是一回事。你的实验就是蛋白质-蛋白质相互作用，不用WB同样可以。红外、紫外、CD、NMR、核磁共振、免疫共沉淀、酵母双杂交等试验方法很多。...

我们老师要用WB做，蛋白质-蛋白质相互作用，没明白什么意思？能具体讲讲吗？如果我的实验物质对细胞有效果，蛋白表达有正常的差异性，能说明的是什么问题？ 谢谢您
赞一下 回复此楼
9楼2013-11-14 16:19:52
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nininini1

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by nininini1 at 2013-11-14 16:14:46
还想请教一个问题，我做磷酸化蛋白的Wb时，一抗，二抗用什么稀释（是用TBST稀释，TBST中要加BSA或者脱脂奶粉吗？）一抗，二抗的去除液是用TBST吗，里面用加BSA或者脱脂奶粉吗？...

不好意思，问错了不是一抗，二抗去除液，是用一抗孵育完，用TBST洗一下膜，这个tbst里面用加BSA或脱脂奶粉吗？
赞一下 回复此楼
10楼2013-11-14 20:56:52
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 nininini1 的主题更新
381/4返回列表1234下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 论文翻译-EnPapers美助理教授团队-SCI英文润色
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 博士后创新人才支持计划公示 +9 aishida144 2024-06-14 14/700 2024-06-16 08:50 by litleprince
[找工作] 江西双非一本和四川双一流高校如何选择？ 5+7 寒山敲钟 2024-06-12 23/1150 2024-06-16 06:52 by puterde
[文学芳草园] 累并快乐着 +13 MYHLD521 2024-06-14 13/650 2024-06-15 22:59 by zeolitess
[教师之家] 每次骚扰女学生的都是院系领导，而不是普通教师，小编们要注意措辞正确 +7 zju2000 2024-06-15 9/450 2024-06-15 22:54 by zeolitess
[硕博家园] 博士毕业高校和就业的相关问题 +4 SCITOPPP 2024-06-14 6/300 2024-06-15 18:54 by SCITOPPP
[考博] 2025考博 +4 自强不息a?a 2024-06-15 6/300 2024-06-15 12:36 by 自强不息a?a
[论文投稿] 审稿问题：为什么荧光激发波长和紫外吸收波长差的大？ 10+4 sdawege 2024-06-14 8/400 2024-06-14 22:39 by 东北读书人
[基金申请] 工材E口JQ有消息了吗 +4 babyduck 2024-06-11 4/200 2024-06-14 17:23 by firepick
[硕博家园] 关于硕博连读的一些疑问？ +4 Lwenter 2024-06-14 4/200 2024-06-14 14:32 by ou0551
[有机交流] ππ堆积会发生在有机溶剂中吗 5+3 zibuyu0420 2024-06-13 4/200 2024-06-14 14:17 by 小肉干
[论文投稿] 投稿kbs被拒后，系统提供的推荐的其他期刊有用吗？ +3 chenrui2015 2024-06-10 3/150 2024-06-14 10:30 by Tr.sjx1997
[论文投稿] 文章proof要求使用机构的邮箱 5+3 不可不信缘 2024-06-11 11/550 2024-06-14 07:00 by 3001160025
[考博] 还能读上博士吗 +14 小伙走起 2024-06-09 24/1200 2024-06-14 06:32 by 18787065176
[有机交流] 旋蒸请教 +6 办公室摸鱼 2024-06-09 9/450 2024-06-13 21:31 by wuxiaominggo
[基金申请] 博士后面上项目状态还是专家评审吗 10+9 Thatcheremu 2024-06-13 55/2750 2024-06-13 21:23 by 乌合麒麟
[基金申请] 连续两年医学口青年项目初审体会 +11 进击的荣耀 2024-06-09 18/900 2024-06-13 17:27 by 进击的荣耀
[硕博家园] 考博应该从哪里开始准备 +6 亮姐2019 2024-06-11 8/400 2024-06-13 12:53 by 帕秋莉GO
[基金申请] 博后特助这周出结果吗？往年都是啥时候啊？ +13 jsqy 2024-06-12 17/850 2024-06-12 19:55 by Lynn212
[硕博家园] 申博 +3 悦悦小小鱼 2024-06-12 3/150 2024-06-12 15:11 by chen5805
[教师之家] 公办双非，学生论文升学就业都不行。一本大学的论文升学就业没问题吧？ +5 河西夜郎 2024-06-09 5/250 2024-06-10 17:59 by yyallen2003
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭