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克隆转化，转化子就是不含目的基因。
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我的目的基因是750bp，质粒载体是PET-24a。 我从我师兄的菌提取质粒，然后用KOD酶PCR目的基因。 然后两步酶切质粒和目的基因。NdeI酶切，胶回收，再BamHI酶切，再回收。酶切时间是3个小时以上。 提质粒、PCR、回收后都有电泳检测，条带位置正确。 然后用东洋纺的高效链接液链接目的基因和质粒的酶切片段。连接时间大概时2个小时以上。 转化到感受态细胞JM109，热击法。 然后培养在含Kan+的平板上。 第一次没有长，第二次4个平板，只有一个平板上长了3个，第三次，4个平板上都有，每个大约3—5个。 PCR检测，都没有P出目的片段。 想请教下各位大神，大概会是什么问题，那些地方需要改进。 |
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