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大片段PCR扩增求助
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serhhrr
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大片段PCR扩增求助
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我需要做一个RTPCR,扩增未知目的条带,大小约为3000bp,循环体系如下:94℃ 30s,54-60℃ 30s , 72℃ 3-4min。酶的话用过LA Taq,Taq酶都用过,也换人操作过,可一直P不出来,求助各位高手!!
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1楼
2013-10-23 15:50:04
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青青草allan
银虫
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引用回帖:
6楼
:
Originally posted by
David勇
at 2013-10-23 18:12:28
http://www.baidupcs.com/file/170944ed269c7853feb9e4f72208d8cd?xcode=193a8282cba12624ed50578564069c64b6cf35bbd381e5a0&fid=168080933-250528-1613663304&time=1382523045&sign=FDTAXER-DCb740cc ...
您给的上面这个链接打不开了,我想知道是哪两种酶?谢谢!
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22楼
2014-09-12 16:47:32
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David勇
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2013-10-23 17:33:27
你是不是在做RACE?我也在做这个觉得挺难的。不过看资料好像混用一种高效的酶和保真的酶会比较有效。不过LA taq很多人都选这个做也能做出来。有人建议减少变性时间会有效。
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2楼
2013-10-23 16:04:49
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serhhrr
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引用回帖:
2楼
:
Originally posted by
David勇
at 2013-10-23 16:04:49
你是不是在做RACE?我也在做这个觉得挺难的。不过看资料好像混用一种高效的酶和保真的酶会比较有效。不过LA taq很多人都选这个做也能做出来。有人建议减少变性时间会有效。
嗯,变性时间?这个我没试过,别的都改变过来,模板也换过几次都没用呢
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3楼
2013-10-23 16:52:20
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taccycle
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2013-10-23 17:33:37
首先啊这个模板质量会严重影响你的实验,做这种实验请确保你有高质量的模板!!!!其次你可以把PCR体系放大,把模板量加大,把延伸时间放长,比如放到6min没有问题的
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4楼
2013-10-23 17:17:02
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