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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » WB结果膜总是黑成一片是怎么回事
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民爱桥

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by jukongka at 2013-10-24 10:37:50
一抗孵育过夜没问题。
从楼主提供的图片看，还是因为洗膜不充分造成的背景。第二张曝光时间，显影时间控制的还是合适的。
解决办法，增加洗膜TBST体积，延长洗膜时间到10分钟以上，洗膜摇床速度增大一些。

能问一你们的TBST是怎么配的吗？
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11楼2013-10-24 16:12:27
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niushuaiji

金虫 (正式写手)

不放弃的小鸟

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 民爱桥 at 2013-10-24 16:08:09
刚开始用的蒸馏水，后来嫌麻烦，就换成蒸馏水了...

以前做northern的时候，老师出现问题，后来用去离子水就没事了，所以我建议还是用去离子水
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Tobeornottobe,that'saproblem
12楼2013-10-24 19:23:19
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民爱桥

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by niushuaiji at 2013-10-24 19:23:19
以前做northern的时候，老师出现问题，后来用去离子水就没事了，所以我建议还是用去离子水...

好的，我试一试
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13楼2013-10-24 21:01:12
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九霄环佩

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
民爱桥: 金币+5 2013-10-25 09:38:14
我一直是一抗4度孵育过夜，挺好的。我觉得是洗膜不够充分，可延长洗膜时间

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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14楼2013-10-25 07:15:01
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zhanghan

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
15楼2013-10-26 15:25:31
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wodexinqin

铁杆木虫 (著名写手)

为卿痴狂 傻瓜帮帮主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
民爱桥: 金币+5 2013-10-27 09:06:27
民爱桥: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-01-07 09:26:53
你这种情况，如果是化学发光，不把膜上的多余液体除尽就去发光，是会产生这种背景的，在加发光液之前先用吸水纸把膜表面的多余液体吸干，膜放在平整干净透明的载体上，再去发光试试看。
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其实我对自己也并不十分了解……
16楼2013-10-26 19:37:54
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shalleychen

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
民爱桥: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-01-07 09:27:10
封闭没有封闭好，如果背景过高建议封闭Over night，然后就是孵二抗时间不要过长。。。
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workhard,hardwork
17楼2014-01-06 22:05:39
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Budaogao

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 茉莉梦梦 at 2013-10-23 11:45:01
我也是才开始做wb，共勉。
你们实验室有其他人做么？看看师兄师姐的情况，有的时候某一批配的试剂有问题大家都会出现类似的问题，否则就是自己实验要改进啦。
1、背景颜色深可能是封闭的问题，我因为每次做到晚上 ...

真的可以封闭过夜吗？我显影好深，可以再重新封闭吗请问

发自小木虫IOS客户端
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18楼2019-01-24 21:34:27
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