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1楼2013-10-23 09:45:20

Budaogao

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5楼: Originally posted by 茉莉梦梦 at 2013-10-23 11:45:01
我也是才开始做wb，共勉。
你们实验室有其他人做么？看看师兄师姐的情况，有的时候某一批配的试剂有问题大家都会出现类似的问题，否则就是自己实验要改进啦。
1、背景颜色深可能是封闭的问题，我因为每次做到晚上 ...

真的可以封闭过夜吗？我显影好深，可以再重新封闭吗请问

发自小木虫IOS客户端

18楼2019-01-24 21:34:27

查看全部 18 个回答

niushuaiji

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不放弃的小鸟

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gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-10-23 10:39:13
民爱桥: 金币+5, ★有帮助 2013-10-24 16:08:19

用的什么水？换成超纯去离子水试试

Tobeornottobe,that'saproblem

2楼2013-10-23 10:19:39

ericyo918

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背景太深的问题，缩短一抗时间试试。

3楼2013-10-23 10:19:53

凌波丽

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民爱桥: 金币+10, ★有帮助 2013-10-24 16:09:55

背景太高了，原因与解决方法：
1.封闭不充分。延长封闭时间，更换合适的封闭剂（脱脂奶粉，BSA，血清等）。
2. 一抗浓度过高。增加一抗稀释倍数。
3.抗体孵育温度过高。4℃孵育。
4.二抗非特异性结合或与封闭剂交叉反应。设置二抗对照(不加一抗),降低二抗浓度。
5.一抗或二抗与封闭剂有交叉反应。在孵育和洗涤液中加入 Tween-20 以减少交叉反应。
6.洗膜不充分。增加洗涤次数。
7.膜不合适。NC 膜比 PVDF 膜背景低。
8.膜干燥。保证充分的反应液，避免出现干膜现象。

4楼2013-10-23 11:13:01