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jonathan1983

铁虫 (小有名气)


[交流] 50bp的片段与双酶切后的载体(5Kb)连接,效率如何?

求助:50bp的片段与双酶切后的载体(5Kb)连接,用thermo的T4连接酶 22度连接3h,后转化大肠杆菌,竟然长出了很多很多菌落。是载体自连吗?还是连接效率高?
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xieya1234_0

银虫 (小有名气)


你50的片段如何得到,能否保证酶切位点的完整性
10楼2013-10-29 11:17:07
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anjingde

铜虫 (小有名气)


★
jonathan1983(金币+1): 谢谢参与
载体自连的概率非常非常大

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2013-10-22 09:38:48
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奔跑的乌拉龟

铜虫 (正式写手)


看运气了
8楼2013-10-26 14:58:37
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jonathan1983

铁虫 (小有名气)


看来大家都缺钱啊,不管穷人富人
9楼2013-10-28 16:25:57
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jonathan1983

铁虫 (小有名气)


引用回帖:
10楼: Originally posted by xieya1234_0 at 2013-10-29 11:17:07
你50的片段如何得到,能否保证酶切位点的完整性

自己设计了两条链(末端形成粘性末端),由公司合成,二者先退火、再缓慢降温形成杂交双链。这样应该可行吧?
11楼2013-10-29 15:04:41
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xieya1234_0

银虫 (小有名气)


引用回帖:
11楼: Originally posted by jonathan1983 at 2013-10-29 15:04:41
自己设计了两条链(末端形成粘性末端),由公司合成,二者先退火、再缓慢降温形成杂交双链。这样应该可行吧?...

这样是可以的,短片段真心不好连接,多试试吧,要不就把载体酶切时间延长
12楼2013-10-29 16:41:43
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jonathan1983

铁虫 (小有名气)


引用回帖:
12楼: Originally posted by xieya1234_0 at 2013-10-29 16:41:43
这样是可以的,短片段真心不好连接,多试试吧,要不就把载体酶切时间延长...

为什么不好连接呢? 我理解的是,片段越短,运动越快,应该越容易连接啊。
13楼2013-11-01 15:20:22
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简单回复
2013-10-21 22:46   回复  
jonathan1983(金币+1): 谢谢参与
2013-10-21 22:47   回复  
jonathan1983(金币+1): 谢谢参与
neu2345楼
2013-10-22 15:55   回复  
jonathan1983(金币+1): 谢谢参与
shigua6楼
2013-10-23 10:32   回复  
jonathan1983(金币+1): 谢谢参与
恩 [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
nono20097楼
2013-10-23 12:16   回复  
jonathan1983(金币+1): 谢谢参与
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