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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 转基因 » 50bp的片段与双酶切后的载体（5Kb）连接，效率如何？
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jonathan1983

铁虫 (小有名气)

[交流] 50bp的片段与双酶切后的载体（5Kb）连接，效率如何？

求助：50bp的片段与双酶切后的载体（5Kb）连接，用thermo的T4连接酶 22度连接3h，后转化大肠杆菌，竟然长出了很多很多菌落。是载体自连吗？还是连接效率高？
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1楼 2013-10-21 10:30:57
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xieya1234_0

银虫 (小有名气)
你50的片段如何得到，能否保证酶切位点的完整性
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10楼2013-10-29 11:17:07
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anjingde

铜虫 (小有名气)
★
jonathan1983(金币+1): 谢谢参与
载体自连的概率非常非常大

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2013-10-22 09:38:48
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奔跑的乌拉龟

铜虫 (正式写手)
看运气了
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8楼2013-10-26 14:58:37
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jonathan1983

铁虫 (小有名气)
看来大家都缺钱啊，不管穷人富人
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9楼2013-10-28 16:25:57
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jonathan1983

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by xieya1234_0 at 2013-10-29 11:17:07
你50的片段如何得到，能否保证酶切位点的完整性

自己设计了两条链（末端形成粘性末端），由公司合成，二者先退火、再缓慢降温形成杂交双链。这样应该可行吧？
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11楼2013-10-29 15:04:41
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xieya1234_0

银虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by jonathan1983 at 2013-10-29 15:04:41
自己设计了两条链（末端形成粘性末端），由公司合成，二者先退火、再缓慢降温形成杂交双链。这样应该可行吧？...

这样是可以的，短片段真心不好连接，多试试吧，要不就把载体酶切时间延长
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12楼2013-10-29 16:41:43
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jonathan1983

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by xieya1234_0 at 2013-10-29 16:41:43
这样是可以的，短片段真心不好连接，多试试吧，要不就把载体酶切时间延长...

为什么不好连接呢？ 我理解的是，片段越短，运动越快，应该越容易连接啊。
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13楼2013-11-01 15:20:22
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yingying15882楼
2013-10-21 22:46   回复  
jonathan1983(金币+1): 谢谢参与
yingying15883楼
2013-10-21 22:47   回复  
jonathan1983(金币+1): 谢谢参与
neu2345楼
2013-10-22 15:55   回复  
jonathan1983(金币+1): 谢谢参与
shigua6楼
2013-10-23 10:32   回复  
jonathan1983(金币+1): 谢谢参与
恩 [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
nono20097楼
2013-10-23 12:16   回复  
jonathan1983(金币+1): 谢谢参与
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