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求助啊!!关于多糖分离的几个问题
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小弟正在做一个天然药物的多糖分离,由于是第一次做有几个问题不是很懂,请教高手解答一下,不胜感激啊!! 1.我用的是DEAE-cellulose柱,第一次粗分用了3个浓度的Nacl.最后用1M的Nacl冲完以后发现柱子后按要求对柱子再生,发现柱子上仍然颜色较深(样品没脱色),想请教一下现在柱子的颜色对后面的分离有没有影响,如果有影响应该怎么处理. 2.关于样品的除盐,想问一下如何判断样品的盐已经除干净了,我们实验室有 salinitest HI98203 HANNA公司的(58.5g/L-5.58g/L) 还一个是 pure water tester (2-50几mg/l) 我测的时候第一个东西狂难用 读数跳来跳去的,第2个东西样品老超范围.我用1W的膜加水超滤除盐,感觉速度很慢效率不高.不知道高手们都是如何出盐,并判断盐是否干净的. 还有就是用超滤除盐是否好? 以上2个问题麻烦高手解答 |
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2楼2007-12-05 23:33:32
liu200479
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karl2100(金币+1,VIP+0):多谢提供！
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| 分离多糖后层析柱是会有褐色的一个印迹，是色素或与色素结合的多糖，是死吸附，脱盐有两种方法超滤或上Sephadex G15或G25脱盐，Sephadex G15或G25脱盐脱盐脱得干净但有死吸附。超滤法要想脱净，理论上时脱不净的，我用透析带透了两天的多糖，做核磁里面还有Cl信号，最好72以上。还有如果你条件摸得好，离子交换分出的多糖原子量分布也会较窄，注意的千万别超载，复习色谱理论你就明白超载会有什么结果，还有多糖上一遍柱会有相当一部分吸附，最好多收集些材料，现在分离方面真正能装好柱的很少，文献报道的错的比较多，你最好要说明书，比如DEAE-Cellulose,用水装柱就有断层，用碱性溶液装可以避免，还有流速的选择也很关键，你得知道每种填料它的流速范围，最佳流速，来摸索最佳流速，流速过快填料就被压坏了，分出的纯度自然不够，液相的GPC的流速过高1.6万左右的柱子就被压坏了，希望你要格外注意。 |
3楼2007-12-06 09:09:42
liu200479
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4楼2007-12-06 09:48:19
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十分感谢各位的解答特别是２楼的，另外还有个问题想请教DEAE-cellulose我用的deae-cellulose 是以前师兄留下来的（但是基本没用过） 现在放在一个大烧杯里面沉淀下来可能有个２Ｌ多，我想问下有关上样量的问题，我看方积年９月分那篇综述最新写的综述说１００g的deae-cellulose 的上样量大概是０．５g-1.5g，现在我那个ＤＥＡＥ是溶帐过的，１００g的deae-cellulose 粉溶涨以后体积能有多少．另外它的上样量能到多少？ 还一个问题，ＧＰＣ柱子上样以后大于１００００分子量（用的１１Ｗ的标准葡聚糖）的糖都没信号，浓度都到５mg/ml了不知道是什么问题． ＣＰＵ确实是药大，不过我今年毕业了呵呵～  [ Last edited by cpu0343126 on 2007-12-6 at 11:10 ] |
5楼2007-12-06 11:06:11
liu200479
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DEAE-cellulose的上样量去向Whatmen公司要或上网收，如果我没记错网上对应可能是吸附蛋白量，你可以试试根据糖的电荷或离子强度自己换算。 首先我非常尊敬方积年教授，我要指出的一点是对于新多糖或未知的文献，已知文献不一定适合自己的样品（你的多糖单糖组成导致的电荷或离子强度与已知的不一定相同），自己要根据实验事实调节，离子交换的分离条件摸索要根据样品的分离度来优化上样量，分的好就多上样，分的不开就少上，还要注意流速，流速过快从你开始分离时到分离结束你的柱长会缩短，还要不防止扩散尽量减少停柱等。 ＧＰＣ柱子上样以后大于１００００分子量（用的１１Ｗ的标准葡聚糖）的糖都没信号，浓度都到５mg/ml了不知道是什么问题． 检测器的种类及灵敏度？GPC柱的范围i，多糖溶解度小，样品是否全溶解，过滤了吗，新柱子也有死吸附考虑没有？ |
6楼2007-12-30 16:30:50
liu200479
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7楼2007-12-30 16:43:30
ffs
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8楼2007-12-30 20:43:27