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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 一直提不出棉花的总RNA，要崩溃了
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郑顺利

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 416114799 at 2013-10-17 18:07:11
植物比较难提，建议用sigma的试剂盒

好的，我试试，谢谢！
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努力过才不会留太多的遗憾
11楼2013-10-18 08:51:43
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lmcyjxs

金虫 (正式写手)
我最近也在提取木本植物的成熟叶片RNA，也试过很多试剂盒及方法，包括OMEGA试剂盒、天根试剂盒、天净沙试剂盒，CTAB法、CTAB-LiCL法、异硫氰酸胍法，都不行，提取的只有一条5S条带，要么就两条带，其中28S和18S混成一个条带，5S处一条带。也在头痛中，不过请问你的棉花是什么部位？花吗？采样有无问题？采样要新鲜，研磨要充分、裂解要充分，这些都做到了，那么该是内源性酶和杂质太多了，需要有针对性的措施。我之前提取的沉淀一直有褐化现象，后来终于改善了，但是还是降解的，呈弥散状态，还在继续改进中。。。。。。。望多多交流啊
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思路决定出路。。。
12楼2013-10-18 10:46:29
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植物园园长

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 郑顺利 at 2013-10-18 08:49:14
谢谢，我再试试。...

建议再做的时候做一个实验室能提出来的新鲜棉花材料做对照，看是否是你自己的样本问题。
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在路上～～Marketing!
13楼2013-10-18 12:59:06
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郑顺利

金虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by lmcyjxs at 2013-10-18 10:46:29
我最近也在提取木本植物的成熟叶片RNA，也试过很多试剂盒及方法，包括OMEGA试剂盒、天根试剂盒、天净沙试剂盒，CTAB法、CTAB-LiCL法、异硫氰酸胍法，都不行，提取的只有一条5S条带，要么就两条带，其中28S和18S混成 ...

:hand我是从棉花叶片和根系中提取。请问你是怎么改善褐化现象的呢？你现在是用什么方法提的？降解严重吗？
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努力过才不会留太多的遗憾
14楼2013-10-19 09:53:05
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郑顺利

金虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 植物园园长 at 2013-10-18 12:59:06
建议再做的时候做一个实验室能提出来的新鲜棉花材料做对照，看是否是你自己的样本问题。...

谢谢！不过我一直用的是新鲜的样。
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努力过才不会留太多的遗憾
15楼2013-10-19 09:55:42
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lmcyjxs

金虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 郑顺利 at 2013-10-19 09:53:05
:hand我是从棉花叶片和根系中提取。请问你是怎么改善褐化现象的呢？你现在是用什么方法提的？降解严重吗？...

我现在用CTAB-LiCL法提的，在LiCL沉淀那步加入终浓度为1%的巯基乙醇，明显改善沉淀颜色，只是还是降解，说明问题不仅出在这里，应该是一开始研磨到裂解这步出现问题较为可能。。。另外关于棉花的提取已有文献报道了啊，按他们的方法还是提不出来吗？题目是：用CTAB-PVP法提取棉花各组织总RNA的研究；
我认为你的材料假如是新鲜的，还要保证研磨没有问题，裂解是否充分，不要加太多的粉末，粉末太多就裂解不充分，就容易降解。
望多多交流！
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思路决定出路。。。
16楼2013-10-20 19:24:36
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lmcyjxs

金虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 郑顺利 at 2013-10-18 08:51:43
好的，我试试，谢谢！...

你有用sigma试剂盒吗？结果好用吗
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思路决定出路。。。
17楼2013-10-20 19:25:30
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