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郑顺利

金虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 416114799 at 2013-10-17 18:07:11
植物比较难提,建议用sigma的试剂盒

好的,我试试,谢谢!
努力过才不会留太多的遗憾
11楼2013-10-18 08:51:43
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lmcyjxs

金虫 (正式写手)

我最近也在提取木本植物的成熟叶片RNA,也试过很多试剂盒及方法,包括OMEGA试剂盒、天根试剂盒、天净沙试剂盒,CTAB法、CTAB-LiCL法、异硫氰酸胍法,都不行,提取的只有一条5S条带,要么就两条带,其中28S和18S混成一个条带,5S处一条带。也在头痛中,不过请问你的棉花是什么部位?花吗?采样有无问题?采样要新鲜,研磨要充分、裂解要充分,这些都做到了,那么该是内源性酶和杂质太多了,需要有针对性的措施。我之前提取的沉淀一直有褐化现象,后来终于改善了,但是还是降解的,呈弥散状态,还在继续改进中。。。。。。。望多多交流啊
思路决定出路。。。
12楼2013-10-18 10:46:29
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植物园园长

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 郑顺利 at 2013-10-18 08:49:14
谢谢,我再试试。...

建议再做的时候做一个实验室能提出来的新鲜棉花材料做对照,看是否是你自己的样本问题。
在路上~~Marketing!
13楼2013-10-18 12:59:06
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郑顺利

金虫 (正式写手)

引用回帖:
12楼: Originally posted by lmcyjxs at 2013-10-18 10:46:29
我最近也在提取木本植物的成熟叶片RNA,也试过很多试剂盒及方法,包括OMEGA试剂盒、天根试剂盒、天净沙试剂盒,CTAB法、CTAB-LiCL法、异硫氰酸胍法,都不行,提取的只有一条5S条带,要么就两条带,其中28S和18S混成 ...

:hand我是从棉花叶片和根系中提取。请问你是怎么改善褐化现象的呢?你现在是用什么方法提的?降解严重吗?
努力过才不会留太多的遗憾
14楼2013-10-19 09:53:05
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郑顺利

金虫 (正式写手)

引用回帖:
13楼: Originally posted by 植物园园长 at 2013-10-18 12:59:06
建议再做的时候做一个实验室能提出来的新鲜棉花材料做对照,看是否是你自己的样本问题。...

谢谢!不过我一直用的是新鲜的样。
努力过才不会留太多的遗憾
15楼2013-10-19 09:55:42
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lmcyjxs

金虫 (正式写手)

引用回帖:
14楼: Originally posted by 郑顺利 at 2013-10-19 09:53:05
:hand我是从棉花叶片和根系中提取。请问你是怎么改善褐化现象的呢?你现在是用什么方法提的?降解严重吗?...

我现在用CTAB-LiCL法提的,在LiCL沉淀那步加入终浓度为1%的巯基乙醇,明显改善沉淀颜色,只是还是降解,说明问题不仅出在这里,应该是一开始研磨到裂解这步出现问题较为可能。。。另外关于棉花的提取已有文献报道了啊,按他们的方法还是提不出来吗?题目是:用CTAB-PVP法提取棉花各组织总RNA的研究;
我认为你的材料假如是新鲜的,还要保证研磨没有问题,裂解是否充分,不要加太多的粉末,粉末太多就裂解不充分,就容易降解。
望多多交流!
思路决定出路。。。
16楼2013-10-20 19:24:36
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lmcyjxs

金虫 (正式写手)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 郑顺利 at 2013-10-18 08:51:43
好的,我试试,谢谢!...

你有用sigma试剂盒吗?结果好用吗
思路决定出路。。。
17楼2013-10-20 19:25:30
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