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jysw_wx

新虫 (初入文坛)

[求助] 【交流/求助】二维电泳找诱导凋亡的人乳腺癌细胞与正常癌细胞的蛋白差异

各位前辈高手，本实验室新手要做诱导凋亡后乳腺癌细胞与正常的癌细胞差异蛋白的表达，需要用二维电泳（实验室新进仪器，都不会用），--------------求教1.第二向需要用多大规格的胶才能区分蛋白呀。2。需要用提的细胞全蛋白液先跑第一项吧，大概要怎么摸条件，是不是很复杂？-----------------新手求教，还请多多指教，不胜感激
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1楼 2013-10-15 14:11:27
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daibingling

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-10-15 15:57:33
我也打算做二维凝胶电泳，咨询过老师一些问题，试着回答一下。首先你先用蛋白跑Western，做个预实验，然后在选择跑二维电泳的胶条PH。貌似跑二维电泳是比较复杂，以后多交流
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2楼2013-10-15 14:43:42
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jysw_wx

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by daibingling at 2013-10-15 14:43:42
我也打算做二维凝胶电泳，咨询过老师一些问题，试着回答一下。首先你先用蛋白跑Western，做个预实验，然后在选择跑二维电泳的胶条PH。貌似跑二维电泳是比较复杂，以后多交流

是的，自己摸索太费劲了，多交流哈。多谢了。
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3楼2013-10-15 16:59:15
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DBWJ

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-10-17 10:09:37
你的是什么仪器呀，新仪器应该有工程师给培训吧，而且应该也有使用手册的
找表达量的差异为什么要做Western？正常的和病变的都跑双向，软件一分析就都出来了
难道是想做完双向然后接Western？
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4楼2013-10-16 14:40:00
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DBWJ

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-10-17 10:09:42
你实验室的胶规格是多大的？11cm、13cm、18cm、24cm？胶条越长分辨率越高
pH值的话既然做总蛋白，先选范围广的呗，等做完了再根据结果看适不适合呗
双向电泳一向和二向是整体的，只跑一向你也看不出什么东西，聚焦条件根据你仪器，胶条长度选择，先找说明书按照推荐的做一次，不行在调整，文献有很多，多看看做做就会了
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5楼2013-10-16 14:45:57
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jysw_wx

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by DBWJ at 2013-10-16 14:45:57
你实验室的胶规格是多大的？11cm、13cm、18cm、24cm？胶条越长分辨率越高
pH值的话既然做总蛋白，先选范围广的呗，等做完了再根据结果看适不适合呗
双向电泳一向和二向是整体的，只跑一向你也看不出什么东西，聚焦 ...

多谢指点。就先打算把凋亡的和正常的都跑二维再对比。我们的新仪器是GE的，但是只能跑7cm，11cm的的吧，大的好想没买配件，只能用旧伯乐的能跑17cm，，再大的还没有，是不是小胶条的不适合做这样的分析。大神能不能指点一下后面是再做免疫印记还是上质谱，不过现在还做不到那么远吧。再次感谢
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6楼2013-10-16 17:00:55
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DBWJ

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-10-17 10:09:49
jysw_wx: 金币+10, ★有帮助 2013-10-18 12:32:27
7CM和11CM分离效果不是特别的好的，不过如果你样品复杂度不是那么高的话可以用的
后面免疫印迹和质谱就得看你实验的要求了，一般的话都是做质谱鉴定的，免疫印迹的话胶越大越不好做
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7楼2013-10-17 10:09:06
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