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银虫 (初入文坛)

[求助] 实时荧光定量pcr,cDNA的加入量会影响结果的准确度吗?

大家好,最近一直做荧光定量pcr,20ul体系中3ug的rna反转录得到的cDNA,取4ul作为pcr的模板,10ul EvaGreen,4ul引物,2ulRNas水,这个体系可以得到挺好的结果,但是溶解曲线的温度在77°,不知道是不是引物二聚体,而且我觉得模板的量加的太多了,实验不能重复,一次就用光了,不知道是不是应该稀释一下?
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银虫 (初入文坛)

引用回帖:
18楼: Originally posted by taccycle at 2013-10-17 11:25:18
RNA电泳的话要用1%的胶和那个2000的Marker,如果没有电泳条带就说明你的RNA浓度有点低,那你反转录的时候可以多用点RNA,同时相应减少体系中水的用量。1%的胶不适合用来检测短片段,你至少配制个2%的胶,这样用200 ...

1%的不行吗?不是都用1%的胶做rna电泳吗?
我做DNA电泳连mark都跑不出来,也没觉得出什么问题啊?
24楼2013-10-22 21:40:45
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