纳米材料上偶联抗体之后老有沉淀，分散性很差，求高手讨论解决 - 微米和纳米 - 学术交流

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21楼2013-10-11 16:32:15

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s397464517

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21楼: Originally posted by Jane-zhu at 2013-10-11 16:32:15
您的意思是减小纳米材料的浓度可以减轻团聚？...

我只是把量都减半，浓度没有变。合成了两次都没有发生团聚，昨天也试了，也没有团聚。不知道这个什么原因，今天试着原量合成看看会不会团聚

资源地！http://emuch.net/bbs/taotie.php?action=view&amp;amp;ttid=10282

22楼2013-10-12 08:55:54

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Jane-zhu

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22楼: Originally posted by s397464517 at 2013-10-12 08:55:54
我只是把量都减半，浓度没有变。合成了两次都没有发生团聚，昨天也试了，也没有团聚。不知道这个什么原因，今天试着原量合成看看会不会团聚...

我明天也去试试

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

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23楼2013-10-13 13:03:37

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rapidtest

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蛋白偶联中较容易出现此问题。主要原因可能在于蛋白偶联纳米粒子相当于蛋白改性；改性太厉害，溶解性就出问题了。所以可以尝试调整纳米粒子和蛋白的比例，纳米粒子比例低点情况估计会改善。

24楼2013-10-14 13:44:42

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同时，注意反应体系浓度，说简单点就是反应体积大点，蛋白浓度不要太高，太高也容易出现沉淀，况可能和静电有关。

通常EDC/NHS法比较容易进行，反应时间不要太长，简单试下，看看反应浑浊出现的时间，在出现浑浊前进行产物处理。

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Roy_He

25楼2013-10-14 13:50:02

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另外，偶联剂的用量也是个影响因素，在能连上取的前提下，少用点。

26楼2013-10-14 13:51:57

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Jane-zhu

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24楼: Originally posted by rapidtest at 2013-10-14 13:44:42
蛋白偶联中较容易出现此问题。主要原因可能在于蛋白偶联纳米粒子相当于蛋白改性；改性太厉害，溶解性就出问题了。所以可以尝试调整纳米粒子和蛋白的比例，纳米粒子比例低点情况估计会改善。

谢谢赐教！不过我昨天重复实验的时候发现，EDC加入后很快纳米颗粒就团聚了，不知道是不是纳米颗粒的问题

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27楼2013-10-15 10:13:15

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10楼: Originally posted by Jane-zhu at 2013-10-10 17:28:10
之前试了PH5.6的MES，偶联的效果不理想，蛋白都会析出来...

唉，我也是在做羧基磁珠连蛋白的实验，PH6.0的MES现配的EDC+NHS 活化羧基，然后加抗体，确实感觉不理想啊，反应的体系就是羧基磁珠+抗体+MES，对照是羧基磁珠+BSA+MES，2mg磁珠对应50ug抗体。结果反应完了磁分离取上清测蛋白，用G250和Nanodrop1000测出来感觉偶联率很低啊，另外BSA那组甚至都没偶联上，上清中测出来的BSA和原液的BSA浓度几乎一样。。。非常纳闷，麻烦看见的虫友给个建议！！

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28楼2013-10-15 15:32:26

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25楼: Originally posted by rapidtest at 2013-10-14 13:50:02
同时，注意反应体系浓度，说简单点就是反应体积大点，蛋白浓度不要太高，太高也容易出现沉淀，况可能和静电有关。

通常EDC/NHS法比较容易进行，反应时间不要太长，简单试下，看看反应浑浊出现的时间，在出现浑浊 ...

麻烦帮忙看下我的情况，感激不尽！！
我还停留在提高羧基磁珠对蛋白的偶联率，唉悲剧
PH6.0的MES现配的(5mg/ml)EDC+(5mg/ml)NHS 活化羧基，都加了200ul，37度悬浮活化30min,2mg的羧基磁珠.
偶联50ug抗体，37度悬浮偶联4个小时。反应的体系就是羧基磁珠+抗体+MES，对照是羧基磁珠+BSA+MES。取上清测蛋白的时候，用G250和Nanodrop1000测的，偶联率很低，另外BSA那组甚至都没偶联上，这是不是可以证明是我偶联方式的问题？按理BSA应该可以偶联上的吧？上清中测出来的BSA和原液的BSA浓度几乎一样。。。

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29楼2013-10-15 15:41:06

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Jane-zhu

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29楼: Originally posted by Roy_He at 2013-10-15 15:41:06
麻烦帮忙看下我的情况，感激不尽！！
我还停留在提高羧基磁珠对蛋白的偶联率，唉悲剧
PH6.0的MES现配的(5mg/ml)EDC+(5mg/ml)NHS 活化羧基，都加了200ul，37度悬浮活化30min,2mg的羧基磁珠.
偶联50ug抗体，37度悬 ...

EDC要现配现用，我们实验室做过偶联磁珠的，只加EDC,不用NHS
还有37度悬浮偶联4个小时是不是时间太长了，37℃最多一个小时，你的时间会不会太长了