24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 3026  |  回复: 41

Jane-zhu

银虫 (小有名气)

内容已删除
年年岁岁花相似,岁岁年年人不同。
21楼2013-10-11 16:32:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

s397464517

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
21楼: Originally posted by Jane-zhu at 2013-10-11 16:32:15
您的意思是减小纳米材料的浓度可以减轻团聚?...

我只是把量都减半,浓度没有变。合成了两次都没有发生团聚,昨天也试了,也没有团聚。不知道这个什么原因,今天试着原量合成看看会不会团聚
资源地!http://emuch.net/bbs/taotie.php?action=view&ttid=10282
22楼2013-10-12 08:55:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Jane-zhu

银虫 (小有名气)

引用回帖:
22楼: Originally posted by s397464517 at 2013-10-12 08:55:54
我只是把量都减半,浓度没有变。合成了两次都没有发生团聚,昨天也试了,也没有团聚。不知道这个什么原因,今天试着原量合成看看会不会团聚...

我明天也去试试

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
年年岁岁花相似,岁岁年年人不同。
23楼2013-10-13 13:03:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rapidtest

捐助贵宾 (正式写手)


蛋白偶联中较容易出现此问题。主要原因可能在于蛋白偶联纳米粒子相当于蛋白改性;改性太厉害,溶解性就出问题了。所以可以尝试调整纳米粒子和蛋白的比例,纳米粒子比例低点情况估计会改善。
24楼2013-10-14 13:44:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rapidtest

捐助贵宾 (正式写手)


同时,注意反应体系浓度,说简单点就是反应体积大点,蛋白浓度不要太高,太高也容易出现沉淀,况可能和静电有关。

通常EDC/NHS法比较容易进行,反应时间不要太长,简单试下,看看反应浑浊出现的时间,在出现浑浊前进行产物处理。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

25楼2013-10-14 13:50:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rapidtest

捐助贵宾 (正式写手)


另外,偶联剂的用量也是个影响因素,在能连上取的前提下,少用点。
26楼2013-10-14 13:51:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Jane-zhu

银虫 (小有名气)

引用回帖:
24楼: Originally posted by rapidtest at 2013-10-14 13:44:42
蛋白偶联中较容易出现此问题。主要原因可能在于蛋白偶联纳米粒子相当于蛋白改性;改性太厉害,溶解性就出问题了。所以可以尝试调整纳米粒子和蛋白的比例,纳米粒子比例低点情况估计会改善。

谢谢赐教!不过我昨天重复实验的时候发现,EDC加入后很快纳米颗粒就团聚了,不知道是不是纳米颗粒的问题
年年岁岁花相似,岁岁年年人不同。
27楼2013-10-15 10:13:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Roy_He

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by Jane-zhu at 2013-10-10 17:28:10
之前试了PH5.6的MES,偶联的效果不理想,蛋白都会析出来...

唉,我也是在做羧基磁珠连蛋白的实验,PH6.0的MES现配的EDC+NHS 活化羧基,然后加抗体,确实感觉不理想啊,反应的体系就是羧基磁珠+抗体+MES,对照是羧基磁珠+BSA+MES,2mg磁珠对应50ug抗体。结果反应完了磁分离取上清测蛋白,用G250和Nanodrop1000测出来感觉偶联率很低啊,另外BSA那组甚至都没偶联上,上清中测出来的BSA和原液的BSA浓度几乎一样。。。非常纳闷,麻烦看见的虫友给个建议!!
人生唯一的安全感,来自于充分体验人生的不安全感。
28楼2013-10-15 15:32:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Roy_He

铜虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
25楼: Originally posted by rapidtest at 2013-10-14 13:50:02
同时,注意反应体系浓度,说简单点就是反应体积大点,蛋白浓度不要太高,太高也容易出现沉淀,况可能和静电有关。

通常EDC/NHS法比较容易进行,反应时间不要太长,简单试下,看看反应浑浊出现的时间,在出现浑浊 ...

麻烦帮忙看下我的情况,感激不尽!!
我还停留在提高羧基磁珠对蛋白的偶联率,唉悲剧
PH6.0的MES现配的(5mg/ml)EDC+(5mg/ml)NHS 活化羧基,都加了200ul,37度悬浮活化30min,2mg的羧基磁珠.
偶联50ug抗体,37度悬浮偶联4个小时。反应的体系就是羧基磁珠+抗体+MES,对照是羧基磁珠+BSA+MES。取上清测蛋白的时候,用G250和Nanodrop1000测的,偶联率很低,另外BSA那组甚至都没偶联上,这是不是可以证明是我偶联方式的问题?按理BSA应该可以偶联上的吧?上清中测出来的BSA和原液的BSA浓度几乎一样。。。
人生唯一的安全感,来自于充分体验人生的不安全感。
29楼2013-10-15 15:41:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Jane-zhu

银虫 (小有名气)

引用回帖:
29楼: Originally posted by Roy_He at 2013-10-15 15:41:06
麻烦帮忙看下我的情况,感激不尽!!
我还停留在提高羧基磁珠对蛋白的偶联率,唉悲剧
PH6.0的MES现配的(5mg/ml)EDC+(5mg/ml)NHS 活化羧基,都加了200ul,37度悬浮活化30min,2mg的羧基磁珠.
偶联50ug抗体,37度悬 ...

EDC要现配现用,我们实验室做过偶联磁珠的,只加EDC,不用NHS
还有37度悬浮偶联4个小时是不是时间太长了,37℃最多一个小时,你的时间会不会太长了
年年岁岁花相似,岁岁年年人不同。
30楼2013-10-15 16:54:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Jane-zhu 的主题更新
信息提示
请填处理意见