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Jane-zhu

银虫 (小有名气)

[求助] 纳米材料上偶联抗体之后老有沉淀,分散性很差,求高手讨论解决

本人最近做上转换发光材料上偶联抗体,材料上修饰的是羧基,用的EDC,NHS活化,但是偶联之后老是有沉淀,感觉纳米材料团聚了,颗粒变大,分散性不好,请问大神们有没有解决方法?
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seallinsky

木虫 (正式写手)

小木虫总版主

另外,你会发现,影响团聚主要是NHS的量,你加入EDC可能没事,但是一加入NHS就会团聚,因此你可以减少一点NHS的量
小木虫总版主
13楼2013-10-10 23:26:32
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s397464517

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
21楼: Originally posted by Jane-zhu at 2013-10-11 16:32:15
您的意思是减小纳米材料的浓度可以减轻团聚?...

我只是把量都减半,浓度没有变。合成了两次都没有发生团聚,昨天也试了,也没有团聚。不知道这个什么原因,今天试着原量合成看看会不会团聚
资源地!http://emuch.net/bbs/taotie.php?action=view&ttid=10282
22楼2013-10-12 08:55:54
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rapidtest

捐助贵宾 (正式写手)


蛋白偶联中较容易出现此问题。主要原因可能在于蛋白偶联纳米粒子相当于蛋白改性;改性太厉害,溶解性就出问题了。所以可以尝试调整纳米粒子和蛋白的比例,纳米粒子比例低点情况估计会改善。
24楼2013-10-14 13:44:42
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rapidtest

捐助贵宾 (正式写手)


同时,注意反应体系浓度,说简单点就是反应体积大点,蛋白浓度不要太高,太高也容易出现沉淀,况可能和静电有关。

通常EDC/NHS法比较容易进行,反应时间不要太长,简单试下,看看反应浑浊出现的时间,在出现浑浊前进行产物处理。

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25楼2013-10-14 13:50:02
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Jane-zhu

银虫 (小有名气)

引用回帖:
29楼: Originally posted by Roy_He at 2013-10-15 15:41:06
麻烦帮忙看下我的情况,感激不尽!!
我还停留在提高羧基磁珠对蛋白的偶联率,唉悲剧
PH6.0的MES现配的(5mg/ml)EDC+(5mg/ml)NHS 活化羧基,都加了200ul,37度悬浮活化30min,2mg的羧基磁珠.
偶联50ug抗体,37度悬 ...

EDC要现配现用,我们实验室做过偶联磁珠的,只加EDC,不用NHS
还有37度悬浮偶联4个小时是不是时间太长了,37℃最多一个小时,你的时间会不会太长了
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30楼2013-10-15 16:54:55
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Jane-zhu

银虫 (小有名气)

引用回帖:
37楼: Originally posted by 蓝天白云3760 at 2014-10-16 14:50:23
你好,请问你的上转换发光材料与抗体偶联有文献吗?我不确定它们的量,偶联后又是怎么测荧光光谱的呢?

没有专门关于偶联的文献,用量要自己摸索
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38楼2014-12-19 21:20:29
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无名222

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
Jane-zhu: 金币+1, 有帮助 2013-10-10 10:04:32
有沉淀是正常的,反应后过滤一下,也可能是偶联剂加过了,引起纳米离子团聚。。。
2楼2013-10-09 20:05:46
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Birdie

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我跟你碰到了一样的情况,请问你的羧基是怎么修饰上去的?修饰羧基后纳米粒子在水溶液中稳定吗?
3楼2013-10-10 00:06:24
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Jane-zhu

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 无名222 at 2013-10-09 20:05:46
有沉淀是正常的,反应后过滤一下,也可能是偶联剂加过了,引起纳米离子团聚。。。

我的沉淀很多,有什么解决办法呢
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4楼2013-10-10 10:04:12
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tommayer

金虫 (小有名气)

楼主自己合的?我想试试看。能给点颗粒么?
5楼2013-10-10 10:49:04
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Jane-zhu

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by tommayer at 2013-10-10 10:49:04
楼主自己合的?我想试试看。能给点颗粒么?

师兄合的,你也需要连蛋白?
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6楼2013-10-10 14:32:03
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seallinsky

木虫 (正式写手)

小木虫总版主

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
Jane-zhu: 金币+1, 有帮助 2013-10-10 17:27:19
我觉得可能是静电的原因,尝试一下在ph 5-6的缓冲体系下进行
小木虫总版主
7楼2013-10-10 16:05:59
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conanzzz

木虫 (正式写手)

分散性差了,荧光稳定性怎么样啊?
8楼2013-10-10 17:13:26
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s397464517

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
Jane-zhu: 金币+1, 有帮助 2013-10-10 18:20:04
额,看来这个方向现在很多人在做啊,本着共同进步的原则,建议你在连接蛋白质的时候调节弱碱性下进行,搅拌速度不能过快,楼主可以尝试一下~
资源地!http://emuch.net/bbs/taotie.php?action=view&ttid=10282
9楼2013-10-10 17:18:24
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Jane-zhu

银虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by seallinsky at 2013-10-10 16:05:59
我觉得可能是静电的原因,尝试一下在ph 5-6的缓冲体系下进行

之前试了PH5.6的MES,偶联的效果不理想,蛋白都会析出来
年年岁岁花相似,岁岁年年人不同。
10楼2013-10-10 17:28:10
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