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Jane-zhu

银虫 (小有名气)

[求助] 纳米材料上偶联抗体之后老有沉淀，分散性很差，求高手讨论解决

本人最近做上转换发光材料上偶联抗体，材料上修饰的是羧基，用的EDC,NHS活化，但是偶联之后老是有沉淀，感觉纳米材料团聚了，颗粒变大，分散性不好，请问大神们有没有解决方法？
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1楼 2013-10-09 17:33:42
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seallinsky

木虫 (正式写手)

小木虫总版主
另外，你会发现，影响团聚主要是NHS的量，你加入EDC可能没事，但是一加入NHS就会团聚，因此你可以减少一点NHS的量
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小木虫总版主
13楼2013-10-10 23:26:32
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s397464517

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
21楼: Originally posted by Jane-zhu at 2013-10-11 16:32:15
您的意思是减小纳米材料的浓度可以减轻团聚？...

我只是把量都减半，浓度没有变。合成了两次都没有发生团聚，昨天也试了，也没有团聚。不知道这个什么原因，今天试着原量合成看看会不会团聚
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22楼2013-10-12 08:55:54
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rapidtest

捐助贵宾 (正式写手)
蛋白偶联中较容易出现此问题。主要原因可能在于蛋白偶联纳米粒子相当于蛋白改性；改性太厉害，溶解性就出问题了。所以可以尝试调整纳米粒子和蛋白的比例，纳米粒子比例低点情况估计会改善。
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24楼2013-10-14 13:44:42
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rapidtest

捐助贵宾 (正式写手)
同时，注意反应体系浓度，说简单点就是反应体积大点，蛋白浓度不要太高，太高也容易出现沉淀，况可能和静电有关。

通常EDC/NHS法比较容易进行，反应时间不要太长，简单试下，看看反应浑浊出现的时间，在出现浑浊前进行产物处理。
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Roy_He
25楼2013-10-14 13:50:02
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Jane-zhu

银虫 (小有名气)
引用回帖:
29楼: Originally posted by Roy_He at 2013-10-15 15:41:06
麻烦帮忙看下我的情况，感激不尽！！
我还停留在提高羧基磁珠对蛋白的偶联率，唉悲剧
PH6.0的MES现配的(5mg/ml)EDC+(5mg/ml)NHS 活化羧基，都加了200ul，37度悬浮活化30min,2mg的羧基磁珠.
偶联50ug抗体，37度悬 ...

EDC要现配现用，我们实验室做过偶联磁珠的，只加EDC,不用NHS
还有37度悬浮偶联4个小时是不是时间太长了，37℃最多一个小时，你的时间会不会太长了
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30楼2013-10-15 16:54:55
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Jane-zhu

银虫 (小有名气)
引用回帖:
37楼: Originally posted by 蓝天白云3760 at 2014-10-16 14:50:23
你好，请问你的上转换发光材料与抗体偶联有文献吗？我不确定它们的量，偶联后又是怎么测荧光光谱的呢？

没有专门关于偶联的文献，用量要自己摸索
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38楼2014-12-19 21:20:29
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无名222

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
Jane-zhu: 金币+1, ★有帮助 2013-10-10 10:04:32
有沉淀是正常的，反应后过滤一下，也可能是偶联剂加过了，引起纳米离子团聚。。。
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2楼2013-10-09 20:05:46
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Birdie

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我跟你碰到了一样的情况，请问你的羧基是怎么修饰上去的？修饰羧基后纳米粒子在水溶液中稳定吗？
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3楼2013-10-10 00:06:24
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Jane-zhu

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 无名222 at 2013-10-09 20:05:46
有沉淀是正常的，反应后过滤一下，也可能是偶联剂加过了，引起纳米离子团聚。。。

我的沉淀很多，有什么解决办法呢
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4楼2013-10-10 10:04:12
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tommayer

金虫 (小有名气)
楼主自己合的？我想试试看。能给点颗粒么？
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5楼2013-10-10 10:49:04
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Jane-zhu

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by tommayer at 2013-10-10 10:49:04
楼主自己合的？我想试试看。能给点颗粒么？

师兄合的，你也需要连蛋白？
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6楼2013-10-10 14:32:03
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seallinsky

木虫 (正式写手)

小木虫总版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
Jane-zhu: 金币+1, ★有帮助 2013-10-10 17:27:19
我觉得可能是静电的原因，尝试一下在ph 5-6的缓冲体系下进行
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小木虫总版主
7楼2013-10-10 16:05:59
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conanzzz

木虫 (正式写手)
分散性差了,荧光稳定性怎么样啊?
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8楼2013-10-10 17:13:26
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s397464517

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
Jane-zhu: 金币+1, ★有帮助 2013-10-10 18:20:04
额，看来这个方向现在很多人在做啊，本着共同进步的原则，建议你在连接蛋白质的时候调节弱碱性下进行，搅拌速度不能过快，楼主可以尝试一下~
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9楼2013-10-10 17:18:24
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Jane-zhu

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by seallinsky at 2013-10-10 16:05:59
我觉得可能是静电的原因，尝试一下在ph 5-6的缓冲体系下进行

之前试了PH5.6的MES，偶联的效果不理想，蛋白都会析出来
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10楼2013-10-10 17:28:10
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