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Jane-zhu

银虫 (小有名气)

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[求助] 纳米材料上偶联抗体之后老有沉淀，分散性很差，求高手讨论解决

本人最近做上转换发光材料上偶联抗体，材料上修饰的是羧基，用的EDC,NHS活化，但是偶联之后老是有沉淀，感觉纳米材料团聚了，颗粒变大，分散性不好，请问大神们有没有解决方法？

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年年岁岁花相似，岁岁年年人不同。

1楼2013-10-09 17:33:42

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Roy_He

铜虫 (初入文坛)

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专业: 免疫生物学

送红花一朵

引用回帖:

25楼: Originally posted by rapidtest at 2013-10-14 13:50:02
同时，注意反应体系浓度，说简单点就是反应体积大点，蛋白浓度不要太高，太高也容易出现沉淀，况可能和静电有关。

通常EDC/NHS法比较容易进行，反应时间不要太长，简单试下，看看反应浑浊出现的时间，在出现浑浊 ...

麻烦帮忙看下我的情况，感激不尽！！
我还停留在提高羧基磁珠对蛋白的偶联率，唉悲剧
PH6.0的MES现配的(5mg/ml)EDC+(5mg/ml)NHS 活化羧基，都加了200ul，37度悬浮活化30min,2mg的羧基磁珠.
偶联50ug抗体，37度悬浮偶联4个小时。反应的体系就是羧基磁珠+抗体+MES，对照是羧基磁珠+BSA+MES。取上清测蛋白的时候，用G250和Nanodrop1000测的，偶联率很低，另外BSA那组甚至都没偶联上，这是不是可以证明是我偶联方式的问题？按理BSA应该可以偶联上的吧？上清中测出来的BSA和原液的BSA浓度几乎一样。。。