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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 测序问题
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乱舞成影

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你尝试过将自己的条带切下来后回收后在送去测序吗？这样可能好一些吧
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11楼2013-10-11 09:34:32
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blueghost2

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by nuoyaeva at 2013-10-11 09:29:14
那你可以尝试从不同的位点测序，如果你目的条带的分子量不大，你可以在70%的位置设计一个反向引物，往上游测序，在30%处设计一个正向引物，往下游测。
...

恩，我也这么想的，如果这次换的引物还是测不出来，就自己设计引物。我的片段1458，是否可以用我pcr的引物，然后再中间再设计个引物进行测序？高人指点一下
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12楼2013-10-11 09:45:38
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blueghost2

新虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 乱舞成影 at 2013-10-11 09:34:32
你尝试过将自己的条带切下来后回收后在送去测序吗？这样可能好一些吧

没试过，这样可以测出来吗？不是说连上载体更容易测序吗？
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13楼2013-10-11 09:47:12
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nuoyaeva

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
blueghost2: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-10-12 10:02:15
引用回帖:
12楼: Originally posted by blueghost2 at 2013-10-11 10:45:38
恩，我也这么想的，如果这次换的引物还是测不出来，就自己设计引物。我的片段1458，是否可以用我pcr的引物，然后再中间再设计个引物进行测序？高人指点一下...

直接用PCR的引物，那么你引物及其附近范围的序列就没办法确认了，因为测序起始和结束部位都是dirty信号，而且1458用头尾测序比较尴尬，中间的范围可能覆盖不到，一般保守一点估计，一条测序链有效读取范围在600-700bp。
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生活是美好的
14楼2013-10-11 17:41:36
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守望者047

金虫 (小有名气)
你用的是生工吗？我已经7次了，有点想换公司

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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数往者顺，知来者逆！
15楼2013-10-11 18:46:45
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乱舞成影

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
13楼: Originally posted by blueghost2 at 2013-10-11 09:47:12
没试过，这样可以测出来吗？不是说连上载体更容易测序吗？...

也是可以测出来的，当然连上载体后更是精确些。
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16楼2013-10-12 09:38:16
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乱舞成影

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
15楼: Originally posted by 守望者047 at 2013-10-11 18:46:45
你用的是生工吗？我已经7次了，有点想换公司

个人觉得 桑尼公司测序可能好一些哦
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17楼2013-10-12 09:38:49
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blueghost2

新虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 守望者047 at 2013-10-11 18:46:45
你用的是生工吗？我已经7次了，有点想换公司

是的，是生工，我也10次了吧，就有一次测出来了，其他的没测出来。
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18楼2013-10-12 10:01:02
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blueghost2

新虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 乱舞成影 at 2013-10-12 09:38:49
个人觉得 桑尼公司测序可能好一些哦...

恩，谢谢。
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19楼2013-10-12 10:01:30
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blueghost2

新虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 乱舞成影 at 2013-10-12 09:38:16
也是可以测出来的，当然连上载体后更是精确些。...

恩，谢谢。
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20楼2013-10-12 10:01:52
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