应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 测序问题
51/1返回列表
查看: 1492  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

blueghost2

新虫 (小有名气)

[求助] 测序问题

我做的实验是重组载体的构建，双酶切验证都是对的，然后测序测了好多次，每次都是说有重叠现象导致不能测序，我问测序公司什么是重叠现象，他说样本中干扰较大测序失败，真是纠结都测了一个多月了，那位高人指点一下啊！！！！！！急急急！！！！！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2013-10-09 10:39:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nuoyaeva

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
blueghost2: 金币+3 2013-10-11 09:45:46
引用回帖:
9楼: Originally posted by blueghost2 at 2013-10-10 10:38:41
分子量一致的可能性不大，因为我要双酶切。非目的基因不可能那么巧也有这两个酶切位点，所以和载体链接的可能性就更小了。样本不纯，这个我也考虑了，觉得可能是杂菌污染，但后来我也很注意这方面，应该不会每次都 ...

那你可以尝试从不同的位点测序，如果你目的条带的分子量不大，你可以在70%的位置设计一个反向引物，往上游测序，在30%处设计一个正向引物，往下游测。
赞一下 回复此楼
生活是美好的
10楼2013-10-11 09:29:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答

wuyao0513

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
换个公司测序吧，实在不行就双酶切后测你的酶切片段
赞一下 回复此楼
2楼2013-10-09 11:13:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nuoyaeva

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-10-09 14:16:52
是不是你的目的蛋白有比较接近的isoform啊，我最近在构建一个质粒，双酶切没问题，但是把质粒做模板PCR的时候，隐约看到是两条相近的带重叠在一起。因为序列很接近，没办法分离开，然后测序的时候就经常测不出来，因为我是自己测序，所以我反复多次分节测序，才基本确定获得的目的条带是我需要的…
赞一下 回复此楼
生活是美好的
3楼2013-10-09 11:47:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blueghost2

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wuyao0513 at 2013-10-09 11:13:53
换个公司测序吧，实在不行就双酶切后测你的酶切片段

换过一次，说是没信号
赞一下 回复此楼
4楼2013-10-09 16:55:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭