24小时热门版块排行榜    

查看: 1491  |  回复: 19
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

blueghost2

新虫 (小有名气)

[求助] 测序问题

我做的实验是重组载体的构建,双酶切验证都是对的,然后测序测了好多次,每次都是说有重叠现象导致不能测序,我问测序公司什么是重叠现象,他说样本中干扰较大测序失败,真是纠结都测了一个多月了,那位高人指点一下啊!!!!!!急急急!!!!!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blueghost2

新虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 乱舞成影 at 2013-10-11 09:34:32
你尝试过将自己的条带切下来后回收后在送去测序吗?这样可能好一些吧

没试过,这样可以测出来吗?不是说连上载体更容易测序吗?
13楼2013-10-11 09:47:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答

wuyao0513

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
换个公司测序吧,实在不行就双酶切后测你的酶切片段
2楼2013-10-09 11:13:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nuoyaeva

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-10-09 14:16:52
是不是你的目的蛋白有比较接近的isoform啊,我最近在构建一个质粒,双酶切没问题,但是把质粒做模板PCR的时候,隐约看到是两条相近的带重叠在一起。因为序列很接近,没办法分离开,然后测序的时候就经常测不出来,因为我是自己测序,所以我反复多次分节测序,才基本确定获得的目的条带是我需要的…
生活是美好的
3楼2013-10-09 11:47:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blueghost2

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wuyao0513 at 2013-10-09 11:13:53
换个公司测序吧,实在不行就双酶切后测你的酶切片段

换过一次,说是没信号
4楼2013-10-09 16:55:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见