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lanhuaorchid

金虫 (著名写手)

orchid

[求助] 求助，40L发酵罐的使用

大肠杆菌工程菌培养，高密度发酵，不知怎么控制溶氧
1）      灭菌时尾气之前的滤芯很容易湿，导致灭菌降温过程中压力升高，发酵过程中也会有罐压升高至1.5bar不能放掉，可能是因为发酵过程中的少量泡沫导致滤芯湿掉的  
2）        湿掉的滤芯风干就可以再用了么，或者有什么更好的清洗方法？
3）        一般在OD多少的时候诱导，最终会获得很高的菌浓？
4）        一般设置转速与DO偶联么？还是补糖与DO偶联？
5）        40L发酵罐装液32L，一般大家补糖都要补多少？
谢谢
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大肠杆菌工程菌发酵 高密度发酵

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orchid
1楼2013-10-08 08:39:54
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回帖置顶 ( 共有2个 )

wentanbaodao

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lanhuaorchid: 金币+5, ★有帮助 2013-10-09 15:59:58
amisking: 回帖置顶 2013-10-10 18:05:33
1.你的尾气之前还有滤芯？这个我真的是头一次听说，尾气一般情况下是直接排放或者加个冷却回流的，没有滤芯一说吧
2.如果真的是空气的滤芯湿了的话，一般情况下就没法再用了。要是水还好点，你要是起泡导致料液进入，就彻底不能用了
3.OD在多少诱导是根据不同的产品的，也得看你的发酵周期，我发酵周期36h，一般在OD达到14左右的时候诱导
4.我补加甘油，最后的量一般是500g/L
仅供参考哈，很少见MM也做发酵罐的
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3楼2013-10-09 08:37:11
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wt3532

木虫 (著名写手)

涛声依旧

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
lanhuaorchid: 金币+4, ★★★很有帮助 2013-10-09 16:05:10
amisking: 回帖置顶 2013-10-10 18:05:36
发酵罐滤芯我们一般拿水泡着，泡完了晾晒。如果做一次发酵用一个滤芯，那也太浪费了。
我做大肠杆菌做得比较少。不过看你的情况。一般前期控制DO，需要将DO和 转速 通气量 级联，优先转速，然后是通气量，但是通气太高很容易产生大量泡沫。
如果有条件的可以买氧气瓶，如果没有条件，只能减少补糖量了。要保证较高的DO，糖最好不要过量，很容易产生代谢副产物乙酸 乙醇。
最后，一般大肠杆菌表达蛋白量一般会比较多，基本上一天时间就OK了。
菌浓越高，对氧气以及营养的需要也越高。最后比生长速率肯定会很低，我觉得你最好找到适合你自己的方法做。
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6楼2013-10-09 11:54:48
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wt3532

木虫 (著名写手)

涛声依旧

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lanhuaorchid: 金币+3, ★有帮助 2013-10-09 16:03:16
引用回帖:
3楼: Originally posted by wentanbaodao at 2013-10-09 08:37:11
1.你的尾气之前还有滤芯？这个我真的是头一次听说，尾气一般情况下是直接排放或者加个冷却回流的，没有滤芯一说吧
2.如果真的是空气的滤芯湿了的话，一般情况下就没法再用了。要是水还好点，你要是起泡导致料液进入 ...

有些发酵罐尾气是有滤芯的，当然也有冷却回流装置，一般滤芯装到回流装置上，灭菌的时候确实会有打湿的情况发生。发酵中后期会出现罐压上升的情况，这个如果是发酵液发泡，还要少量多次加消泡剂。还有，如果一些罐子比较高级，泡沫太多发酵罐直接会停止发酵。或者配一个消泡电极也好吧。
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5楼2013-10-09 11:47:30
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wentanbaodao

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by wt3532 at 2013-10-09 11:47:30
有些发酵罐尾气是有滤芯的，当然也有冷却回流装置，一般滤芯装到回流装置上，灭菌的时候确实会有打湿的情况发生。发酵中后期会出现罐压上升的情况，这个如果是发酵液发泡，还要少量多次加消泡剂。还有，如果一些罐 ...

见过发酵罐带消泡电极的，有的有个弊端，就是当料液起泡到电极时，会自动补泡敌，而当液面下去之后，消泡电极上还是沾有料液，结果可想而知，泡敌不停地向发酵罐中补
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10楼2013-10-09 17:07:15
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骑着狼放羊

金虫 (著名写手)

余香肉丝

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lanhuaorchid: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-10-11 17:16:16
lanhuaorchid: 金币+1, ★有帮助 2013-10-12 11:10:44
（1）目前使用的也是NBS发酵罐，带有进气和出气滤芯，目前还未出现发酵液、气泡溢出堵出气滤芯的情况，平时要经常监控气泡情况，适时添加消泡剂，如果液面过高，危险的话，可适当放出部分培养基；因为目前的发酵罐没有罐压表，是有电磁阀排气来控制罐压好像，所以也不知道罐压多少；
（2）发酵后如果滤芯仅仅是湿了，晾干后即可；如果堵了，给你说个方法，是维修的说的，没试验过，不知道可不可行，堵后的滤芯用超声波超声，再用蒸馏水冲洗干净，然后低温烘干；
（3）OD多少诱导的菌浓最高的话，这个都是相对的吧，有的OD能做到150，甚至200以上，有的最多做到30、40，开始诱导的OD肯定不一样；
（4）目前没有设置过关联；
（5）14.0L发酵罐，上过8L、5.5L，5.5L的补糖400g+/L；
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你是最棒的，只要相信自己，没有做不到！！！
18楼2013-10-10 21:11:33
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hq0250

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+3, 鼓励应助！ 2013-10-08 23:55:56
lanhuaorchid: 金币+3, ★有帮助 2013-10-09 15:56:28
什么是灭菌时尾气之前的滤芯？你的排气管道上有滤芯吗？如果你是指空气进气的滤芯的话，你可以采取给你的进气管道增加保温材料的方式或者给进气管道增加热量，或则在停止使用罐时，开大进气，防止空气因流速减慢导致水分出现。
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2楼2013-10-08 16:44:40
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wentanbaodao

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

忘了一个了，一般是设置转速与溶氧偶连的，因为我做过实验，溶氧对大肠杆菌的产量影响比较大。希望对你有所帮助
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4楼2013-10-09 08:41:14
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lanhuaorchid

金虫 (著名写手)

orchid
引用回帖:
2楼: Originally posted by hq0250 at 2013-10-08 16:44:40
什么是灭菌时尾气之前的滤芯？你的排气管道上有滤芯吗？如果你是指空气进气的滤芯的话，你可以采取给你的进气管道增加保温材料的方式或者给进气管道增加热量，或则在停止使用罐时，开大进气，防止空气因流速减慢导致 ...

就是尾气管道的滤芯，容易湿掉，但通气一段时间后会吹干的，然后罐压会突然全部释放掉
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orchid
7楼2013-10-09 15:58:00
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lanhuaorchid

金虫 (著名写手)

orchid
引用回帖:
3楼: Originally posted by wentanbaodao at 2013-10-09 08:37:11
1.你的尾气之前还有滤芯？这个我真的是头一次听说，尾气一般情况下是直接排放或者加个冷却回流的，没有滤芯一说吧
2.如果真的是空气的滤芯湿了的话，一般情况下就没法再用了。要是水还好点，你要是起泡导致料液进入 ...

NBS发酵罐，尾气有滤芯，对于大肠杆菌，你的发酵周期还挺长的吧？想问一下，40L发酵罐，转速大概在多少？
你补加甘油的参考是什么，DO么，还是pH?
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orchid
8楼2013-10-09 16:02:16
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lanhuaorchid

金虫 (著名写手)

orchid
引用回帖:
6楼: Originally posted by wt3532 at 2013-10-09 11:54:48
发酵罐滤芯我们一般拿水泡着，泡完了晾晒。如果做一次发酵用一个滤芯，那也太浪费了。
我做大肠杆菌做得比较少。不过看你的情况。一般前期控制DO，需要将DO和 转速 通气量 级联，优先转速，然后是通气量，但是通气 ...

学习了滤芯的处理办法，谢谢。
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orchid
9楼2013-10-09 16:06:22
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