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lanhuaorchid金虫 (著名写手)
orchid
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[求助]
求助，40L发酵罐的使用
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大肠杆菌工程菌培养，高密度发酵，不知怎么控制溶氧 1） 灭菌时尾气之前的滤芯很容易湿，导致灭菌降温过程中压力升高，发酵过程中也会有罐压升高至1.5bar不能放掉，可能是因为发酵过程中的少量泡沫导致滤芯湿掉的 2） 湿掉的滤芯风干就可以再用了么，或者有什么更好的清洗方法？ 3） 一般在OD多少的时候诱导，最终会获得很高的菌浓？ 4） 一般设置转速与DO偶联么？还是补糖与DO偶联？ 5） 40L发酵罐装液32L，一般大家补糖都要补多少？ 谢谢 |
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 大肠杆菌工程菌发酵 | 高密度发酵 |
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1.你的尾气之前还有滤芯？这个我真的是头一次听说，尾气一般情况下是直接排放或者加个冷却回流的，没有滤芯一说吧 2.如果真的是空气的滤芯湿了的话，一般情况下就没法再用了。要是水还好点，你要是起泡导致料液进入，就彻底不能用了 3.OD在多少诱导是根据不同的产品的，也得看你的发酵周期，我发酵周期36h，一般在OD达到14左右的时候诱导 4.我补加甘油，最后的量一般是500g/L 仅供参考哈，很少见MM也做发酵罐的 |
3楼2013-10-09 08:37:11
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发酵罐滤芯我们一般拿水泡着，泡完了晾晒。如果做一次发酵用一个滤芯，那也太浪费了。 我做大肠杆菌做得比较少。不过看你的情况。一般前期控制DO，需要将DO和 转速 通气量 级联，优先转速，然后是通气量，但是通气太高很容易产生大量泡沫。 如果有条件的可以买氧气瓶，如果没有条件，只能减少补糖量了。要保证较高的DO，糖最好不要过量，很容易产生代谢副产物乙酸 乙醇。 最后，一般大肠杆菌表达蛋白量一般会比较多，基本上一天时间就OK了。 菌浓越高，对氧气以及营养的需要也越高。最后比生长速率肯定会很低，我觉得你最好找到适合你自己的方法做。 |
6楼2013-10-09 11:54:48
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5楼2013-10-09 11:47:30
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（1）目前使用的也是NBS发酵罐，带有进气和出气滤芯，目前还未出现发酵液、气泡溢出堵出气滤芯的情况，平时要经常监控气泡情况，适时添加消泡剂，如果液面过高，危险的话，可适当放出部分培养基；因为目前的发酵罐没有罐压表，是有电磁阀排气来控制罐压好像，所以也不知道罐压多少； （2）发酵后如果滤芯仅仅是湿了，晾干后即可；如果堵了，给你说个方法，是维修的说的，没试验过，不知道可不可行，堵后的滤芯用超声波超声，再用蒸馏水冲洗干净，然后低温烘干； （3）OD多少诱导的菌浓最高的话，这个都是相对的吧，有的OD能做到150，甚至200以上，有的最多做到30、40，开始诱导的OD肯定不一样； （4）目前没有设置过关联； （5）14.0L发酵罐，上过8L、5.5L，5.5L的补糖400g+/L； |
18楼2013-10-10 21:11:33
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