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Diana905

新虫 (初入文坛)

[求助] 做了质粒电泳并且测了样本OD值,算出来的样品浓度为何差了一个数量级?

对pUC18和pEC2.1两个质粒进行了电泳实验,用imagej软件对电泳胶照片进行了intensity analysis,marker DNA含量0.25μg,一共十一条条带故每条DNA含量约23ng,pUC18样品条带与marker相关条带intensity比值1.875695705
,pEC2.1样品条带与marker相关条带intensity比值5.385783806
,以此数据算得pUC18 DNA浓度0.0426μg/μl,pEC2.1浓度0.122μg/μl。(跑胶用样品1μl)

然而做OD值的时候测得pUC18在260nm处od为0.193,pEC2.1为0.410。根据50μg/ml DNA在260nm处od为1计算得pUC18 DNA浓度0.00965μg/μl,pEC2.1浓度0.0205μg/μl。

为何会差这么多?
做了质粒电泳并且测了样本OD值,算出来的样品浓度为何差了一个数量级?
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sylar1022

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢参与 2013-10-04 06:29:53
Marker每天带含量是不同的,有几条指示带是比较多的…  而且测od也不一定准的,会受很多因素影响,质粒的纯度什么的也不一样… 看你跑的第二条质粒上面好像还有一条带?

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2013-10-03 17:39:14
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Diana905

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by sylar1022 at 2013-10-03 17:39:14
Marker每天带含量是不同的,有几条指示带是比较多的…  而且测od也不一定准的,会受很多因素影响,质粒的纯度什么的也不一样… 看你跑的第二条质粒上面好像还有一条带?

上面有两条带,应该是质粒conformation不同造成的……
3楼2013-10-04 10:25:43
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