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coffee159

金虫 (小有名气)

[求助] 引物的设计

最近要设计引物,在群里面下的Premier 5.0 。可是不太会用。1.按照使用说明上设计引物时,搜索到的引物为什么都在模板的中间,怎样才能有在模板两侧的引物?我需要P的是全基因。2.请问怎样手工设计引物?3.设计的引物怎么改才能符合Tm值和自由能?谢谢高手们的指导。。。
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coffee159

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 稀释浓硫酸 at 2013-09-28 12:47:53
直接将上下游直接分别设定在5'和3'的一段区域内,这样,上游就只会在靠近5'的地方,下游同理。不过这样往往会分值较低,但一般只要条件合适,酶活力较强,片段还是能够被扩增出来的。

谢谢,但是会出现二聚体或发夹结构,这样P出来的效率高吗
4楼2013-09-28 16:17:25
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极道始之魔

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-09-28 13:19:36
我也有这方面的疑惑,楼猪知道了告诉我下,另外想问下检测生长激素活性的方法有哪些
2楼2013-09-28 10:44:53
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稀释浓硫酸

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-09-28 13:19:43
coffee159: 金币+2, 有帮助 2013-09-28 16:16:37
直接将上下游直接分别设定在5'和3'的一段区域内,这样,上游就只会在靠近5'的地方,下游同理。不过这样往往会分值较低,但一般只要条件合适,酶活力较强,片段还是能够被扩增出来的。
就算在地狱,也要建立属于自己的天堂!
3楼2013-09-28 12:47:53
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稀释浓硫酸

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
coffee159: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-09-29 08:49:47
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-09-29 10:14:27
引用回帖:
4楼: Originally posted by coffee159 at 2013-09-28 16:17:25
谢谢,但是会出现二聚体或发夹结构,这样P出来的效率高吗...

效率可能不高,那你就尝试使用KODfx酶扩增。也可以多设计几条引物,一般总会有一对引物能扩出来。
就算在地狱,也要建立属于自己的天堂!
5楼2013-09-28 16:25:57
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