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生院深似海

金虫 (初入文坛)

[求助] 让人恼火的涂平板计数,求助~~已有2人参与

最近需要对菌液进行培养并计数~我通常都是先用流式细胞仪测出菌液浓度,再根据这个数据进行梯度稀释,然后涂平板~一般做4个梯度,将菌液稀释到10的1次、2次、3次、4次方,这样涂~但是,实验结果总是不稳定,大多数时候不长菌。。。很让人恼火~大家有没有类似经历,帮我看看哪里出为题了呗~!!非常感谢~
我养的菌是大肠和金黄,寡营养条件摇的,大概把LB培养液稀释了一万倍以上~
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jianandy

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
7楼: Originally posted by 生院深似海 at 2013-09-25 18:39:40
我摇菌用的20ml培养液。稀释的时候都是稀释成1ml。比如稀释10倍,就在EP管中加900ul灭菌的超纯水,再加100ul菌液~...

100微升菌液加900微升超纯水,培养液中的离子浓度降低了10倍,其他稀释度下离子浓度降低的更多,细菌细胞基本上都溶胀破裂了,怎么还可能生长?楼主说细菌不长,很有可能是渗透压变了。建议用与培养基相同盐浓度的溶液稀释。
11楼2013-09-25 23:19:07
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助! 2013-09-25 16:25:47
我一般直接测OD估算菌的大致浓度,然后梯度稀释的。一般做三个梯度就可以了。不清楚是不是流式细胞仪的问题。
2楼2013-09-25 02:32:33
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wangfei179

木虫 (小有名气)

万分之一LB,多少度培养,养多久?
3楼2013-09-25 10:39:20
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lmqml24

禁虫 (小有名气)

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4楼2013-09-25 12:57:42
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