24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

xiaoganghehe

铜虫 (著名写手)

应助: 9 (幼儿园)
金币: 13.7
帖子: 2031
在线: 404.5小时
虫号: 1238884

[交流] 大肠杆菌中beta-半乳糖苷酶的困惑

小弟是学材料的，对微生物这块一窍不通，但老师要求我做微生物传感器，我也只能硬着头皮做了。
   最近有个想法，通过颜色的变化来反应金属离子的毒性。无意中看到有人用ONPG来检测beta-半乳糖苷酶的活性，并且文献上说对大肠杆菌而言beta-半乳糖苷酶是胞内酶。然后设想：金属离子能改变大肠杆菌细胞壁的通透性，通透性的改变能使细胞内的beta-半乳糖苷酶释放到细胞外。而beta-半乳糖苷酶可以催化水解ONPG，生成黄色的物质，该黄色物质在波长420nm处存在特征吸收峰。那么根据颜色的深浅及峰的强度就能判断出金属离子对大肠杆菌的毒性。
   为了使大肠杆菌产生beta-半乳糖苷酶，我在培养基中加入乳糖。培养后，用0.8%的NaCl溶液清洗离心分离，最后将细菌沉淀分散到PBS溶液中。但令人尴尬的是，即使在不存在金属离子的情况下，往菌液中加入ONPG，就可以观察到明显的黄色变化，并且在波长420nm处可以观察到水解产物的特征吸收峰。
   因此很困惑：beta-半乳糖苷酶是胞内酶还是胞外酶？是不是有的大肠杆菌中beta-半乳糖苷酶是胞内的，而有的则是胞外的？该如何理解胞内酶和胞外酶？

回复此楼

» 猜你喜欢

回收溶剂求助已经有7人回复
职称评审没过，求安慰已经有40人回复
硝基苯如何除去已经有3人回复
A期刊撤稿已经有4人回复
垃圾破二本职称评审标准已经有17人回复
投稿Elsevier的Neoplasia杂志，到最后选publishing options时页面空白，不能完成投稿已经有22人回复
申请26博士已经有5人回复
EST投稿状态问题已经有7人回复
毕业后当辅导员了，天天各种学生超烦已经有4人回复
求助文献已经有3人回复

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

【求助/交流】诱导大肠杆菌产生β半乳糖苷酶要加多少乳糖已经有4人回复

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴

1楼 2013-09-24 13:47:04

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

xiaoganghehe

铜虫 (著名写手)

应助: 9 (幼儿园)
金币: 13.7
帖子: 2031
在线: 404.5小时
虫号: 1238884

引用回帖:

7楼: Originally posted by liuyuexinfei at 2013-09-26 09:19:40
我们也是使用ONPG测定B-半乳糖苷酶的活性，发现只要细菌中含有这个酶，加进去就会变色，并且这个酶的活性非常高，反应速率很快，其实这个酶是一个复合酶，很大的，B-半乳糖苷酶只是其中一部分，还有一部分是a-半乳 ...

我也看了一些相关的文献，B-半乳糖苷酶较大，一般不会透过细胞壁到细胞外。这几天想了一下，有可能是存在浓度梯度，ONPG会通过扩散进入细胞内部，并且也有文献佐证，因此2楼说的有道理。