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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 大肠杆菌中beta-半乳糖苷酶的困惑
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xiaoganghehe

铜虫 (著名写手)

[交流] 大肠杆菌中beta-半乳糖苷酶的困惑

小弟是学材料的，对微生物这块一窍不通，但老师要求我做微生物传感器，我也只能硬着头皮做了。
      最近有个想法，通过颜色的变化来反应金属离子的毒性。无意中看到有人用ONPG来检测beta-半乳糖苷酶的活性，并且文献上说对大肠杆菌而言beta-半乳糖苷酶是胞内酶。然后设想：金属离子能改变大肠杆菌细胞壁的通透性，通透性的改变能使细胞内的beta-半乳糖苷酶释放到细胞外。而beta-半乳糖苷酶可以催化水解ONPG，生成黄色的物质，该黄色物质在波长420nm处存在特征吸收峰。那么根据颜色的深浅及峰的强度就能判断出金属离子对大肠杆菌的毒性。
      为了使大肠杆菌产生beta-半乳糖苷酶，我在培养基中加入乳糖。培养后，用0.8%的NaCl溶液清洗离心分离，最后将细菌沉淀分散到PBS溶液中。但令人尴尬的是，即使在不存在金属离子的情况下，往菌液中加入ONPG，就可以观察到明显的黄色变化，并且在波长420nm处可以观察到水解产物的特征吸收峰。
     因此很困惑：beta-半乳糖苷酶是胞内酶还是胞外酶？是不是有的大肠杆菌中beta-半乳糖苷酶是胞内的，而有的则是胞外的？该如何理解胞内酶和胞外酶？
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1楼 2013-09-24 13:47:04
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liuyuexinfei

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
xiaoganghehe: 金币+2 2013-09-26 09:35:53
引用回帖:
5楼: Originally posted by xiaoganghehe at 2013-09-25 11:04:52
是吗？！您能具体描述一下吗？...

我们也是使用ONPG测定B-半乳糖苷酶的活性，发现只要细菌中含有这个酶，加进去就会变色，并且这个酶的活性非常高，反应速率很快，其实这个酶是一个复合酶，很大的，B-半乳糖苷酶只是其中一部分，还有一部分是a-半乳糖苷酶。我们做的试验比较多，但是楼主的想法还是不错的，关键是怎么证明2楼的想法是关键
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7楼2013-09-26 09:19:40
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547star

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
xiaoganghehe: 金币+2, 有帮助，谢谢这位虫友 2013-09-25 07:45:26
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助！ 2013-09-25 16:24:30
即使是胞内酶，底物可以进入细胞，被反应后，显色产物也可以从细胞出来。
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2楼2013-09-24 22:05:49
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liuyuexinfei

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助！ 2013-09-25 16:24:41
有道理，我们也做个这个实验，也发现了这个现象
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4楼2013-09-25 10:54:16
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xiaoganghehe

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by liuyuexinfei at 2013-09-25 10:54:16
有道理，我们也做个这个实验，也发现了这个现象

是吗？！您能具体描述一下吗？
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5楼2013-09-25 11:04:52
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