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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » DNA与配合物单晶培养问题
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水上涟漪

木虫 (小有名气)

[求助] DNA与配合物单晶培养问题 已有1人参与

我用DNA与配合作用培养单晶，选取溶剂时有些疑问，求助各位大神：
DNA和配合物单晶培养方法：
1.        取Cryschem plate,外围加入缓冲液A约1mL; (A该缓冲溶液为自己配制)；
2.        取Cryschem plate, 在中间空中加入配合物与DNA的混合溶液2uL（总浓度约为10uM,配合物浓度一般为8-12uM, DNA浓度一般为4uM, DNA与配合物的比例可以从1：1，1：2，1：3…）然后再往混合溶液中加入缓冲溶液B 2uL，（B缓冲溶液为购买的Nucleic Acid Mini Screen 24中不同缓冲溶液）.
3.        把plate用透明胶带封好(Crystal Clear Sealing Tape （HR3-511，1.88 inch wide Crystal Clear Sealing Tape)，然后盖上盖子，再在外面报上锡箔纸，避光。
问题是：缓冲液A一般是什么东西，作用为何，文献说自己配制，该怎么配置？
缓冲液B买来就有24种，是直接使用呢还是要先处理？
还有最后如何判断长出了单晶，有什么方便快速的检测方法？
跪求
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1楼 2013-09-24 13:33:49
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水上涟漪

木虫 (小有名气)

自己顶一下，有木有大神知道，求回复
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2楼2013-09-26 09:10:36
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青青子衿0213

金虫 (初入文坛)
好难的说，同求答案
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3楼2013-09-26 11:07:27
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青青子衿0213

金虫 (初入文坛)
有钱没人赚啊
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4楼2013-09-27 08:04:18
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水上涟漪

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 青青子衿0213 at 2013-09-27 08:04:18
有钱没人赚啊

会不会难度太大了，为什么连个建议的都没有
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5楼2013-09-27 10:18:27
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ynkuaile

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-09-27 15:11:19
水上涟漪: 金币+5, ★有帮助, 谢谢你的意见 2013-09-28 16:25:30
1. 缓冲液A一般是什么东西，作用为何，文献说自己配制，该怎么配置？
溶解你的DNA与ligand用，如何配制，要求保证DNA与ligand稳定，参考别人文献。
2. 缓冲液B买来就有24种，是直接使用呢还是要先处理？
直接使用
3. 还有最后如何判断长出了单晶，有什么方便快速的检测方法？
显微镜下直接观察，体式显微镜。
你们组之前没人做过晶体，刚上来就做DNA复合物的晶体，感觉有点难。建议与其他课题组合作。
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6楼2013-09-27 11:04:47
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流晴

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

基本上就是楼上所说了！缓冲液A和B是一样的，只不过和DNA溶液混合后浓度降低，从而与B之间有个浓度差，A里面的水分就挥发到B里面，DNA浓度升高，结晶下来。
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活在当下~
7楼2014-04-07 22:47:25
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