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求助，做了好长时间细胞免疫组化，总是不出结果怎么办已经有12人回复

1楼2013-09-23 16:37:38

conanzzz

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wizardfan: 金币+2, 谢谢参与 2013-09-24 02:10:47

玻璃片没洗干净或者质量不好？再调调焦距能好些么？或者会不会没有封片水分干了成结晶了

2楼2013-09-23 17:24:20

榆榆april

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2楼: Originally posted by conanzzz at 2013-09-23 17:24:20
玻璃片没洗干净或者质量不好？再调调焦距能好些么？或者会不会没有封片水分干了成结晶了

玻片木有处理，但是不是玻片的问题，因为空白玻片看不到这个金针菇。。
焦距也调不出来。。
不过话说是扣上盖玻片之后马上就要封片么？

3楼2013-09-23 18:21:39

conanzzz

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3楼: Originally posted by 榆榆april at 2013-09-23 18:21:39
玻片木有处理，但是不是玻片的问题，因为空白玻片看不到这个金针菇。。
焦距也调不出来。。
不过话说是扣上盖玻片之后马上就要封片么？...

最好封片,要不时间久了干片的话盐应该会结晶吧

4楼2013-09-24 00:13:42

0640409

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137167741: 金币+1, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-09-30 08:37:52

盖玻片载玻片没有酸洗灭菌，怎么保证无菌呢，你要证明不是不是玻璃片的问题就放一个未爬细胞玻璃片在培养基中一起培养处理，再观察，否则没意义。看起来还有可能是盐的结晶

5楼2013-09-24 10:39:28

hl16010921

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析出的盐结晶。制片到观察时间太长，液体干了。封片或在显微镜边上制片立即观察。

6楼2013-09-26 13:17:39

榆榆april

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6楼: Originally posted by hl16010921 at 2013-09-26 13:17:39
析出的盐结晶。制片到观察时间太长，液体干了。封片或在显微镜边上制片立即观察。

其实就是制片之后就观察了的，不知道片子从板里扣出来的时候需不需要把多余的粘在上面的PBS吸掉再扣到盖玻片上？感觉我的封片液加的也多了，有时候都流动了。。这个盐结晶让我很费解呀。。。

7楼2013-09-28 18:31:03

hl16010921

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7楼: Originally posted by 榆榆april at 2013-09-28 18:31:03
其实就是制片之后就观察了的，不知道片子从板里扣出来的时候需不需要把多余的粘在上面的PBS吸掉再扣到盖玻片上？感觉我的封片液加的也多了，有时候都流动了。。这个盐结晶让我很费解呀。。。...

封片液主要成分是甘油，一定要将液体吸尽，否则会直接析出盐（相当于向PBS直接加甘油），但加甘油后会多多少少失水导致细胞变形。可以试试不加封片的效果，不行再封片。如果是倒置的荧光，可以试试不爬片，直接观察，有时效果很好。

8楼2013-09-28 19:12:03

榆榆april

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8楼: Originally posted by hl16010921 at 2013-09-28 19:12:03
封片液主要成分是甘油，一定要将液体吸尽，否则会直接析出盐（相当于向PBS直接加甘油），但加甘油后会多多少少失水导致细胞变形。可以试试不加封片的效果，不行再封片。如果是倒置的荧光，可以试试不爬片，直接观察 ...

谢谢！其实是想爬片了去做共聚焦，现在总爬不好就只能用共聚焦专用皿了，成本比较高。。我记得有一次我没加封片液倒扣在载玻片上也出现了这个金针菇，于是我就排除了封片液的问题了。。还请问吸走PBS的时候是不是用普通的吸水纸就可以？或者其他的什么比较好用的？

9楼2013-09-29 18:46:44

hl16010921

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还是液体干了。我又查了一下别人的做法，据说这样是最好的：pBS洗后，吸去多余的水分，加封闭液，用指甲油封边，一定要用指甲油封边防止水分蒸发。我当年是不断补水

盐溶了再照的。要是倒置的共聚焦倍数不高的话也可以直接在孔里看。

10楼2013-09-29 20:49:52