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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助。。细胞爬片时出现的像金针菇一样的东西肿么破%>_<%
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榆榆april

银虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by hl16010921 at 2013-09-29 20:49:52
还是液体干了。我又查了一下别人的做法，据说这样是最好的：pBS洗后，吸去多余的水分，加封闭液，用指甲油封边，一定要用指甲油封边防止水分蒸发。我当年是不断补水盐溶了再照的。要是倒置的共聚焦倍数不高的话 ...

嗯啊~非常感谢~我觉得很大可能是我封片不及时干了，我再试试争取做好~谢谢~
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11楼2013-09-29 21:06:25
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conanzzz

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

如果还没解决的话,可以试试下面操作步骤:1.最后一步处理后,用10mM PBS清洗,不弃去PBS,用镊子直接夹起载细胞的盖玻片;玻片一侧接触滤纸以吸去富于水分,不必吸太干;2.提前在载玻片上滴好封片剂(或抗淬灭剂),具体剂量取决于玻片大小(一般2.4厘米边长的方形玻片需要8-10uL);3.反扣盖玻片,一侧先接触封片剂然后轻放下,注意排除气泡;4.滤纸从玻片边缘吸去多余封片剂;5.指甲油在周边封片,保证完全密封又不会导致可观察面积太小.
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榆榆april
12楼2013-09-30 00:22:25
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榆榆april

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
12楼: Originally posted by conanzzz at 2013-09-30 00:22:25
如果还没解决的话,可以试试下面操作步骤:1.最后一步处理后,用10mM PBS清洗,不弃去PBS,用镊子直接夹起载细胞的盖玻片;玻片一侧接触滤纸以吸去富于水分,不必吸太干;2.提前在载玻片上滴好封片剂(或抗淬灭剂),具体剂量取 ...

谢谢谢谢~好感动~~~
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13楼2013-09-30 11:35:58
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ifyousee

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

觉得看你步奏没有去除PBS盐离子的过程，那就是说是PBS中的盐分结晶析出来的
有一点非常好奇，固定过的细胞基本不太可能形态发生改变了，为什么还要用PBS呢？难道是DAPI等染液需要这种程度盐离子？
被金针菇压住了就是说这货和细胞不是在一层面的。就是说这货可能是出现在盖玻片的另外一面
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14楼2013-09-30 23:01:05
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榆榆april

银虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by ifyousee at 2013-09-30 23:01:05
觉得看你步奏没有去除PBS盐离子的过程，那就是说是PBS中的盐分结晶析出来的
有一点非常好奇，固定过的细胞基本不太可能形态发生改变了，为什么还要用PBS呢？难道是DAPI等染液需要这种程度盐离子？
被金针菇压住了 ...

PBS盐离子怎么去除呀？不知道要怎么做呢。。用PBS不是为了洗掉多余的染液么？应该不是在盖玻片的另一面吧。。。
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15楼2013-10-03 17:30:07
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