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[求助]
求助。。细胞爬片时出现的像金针菇一样的东西肿么破%>_<%
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向各位有经验的虫友们求助。。 本人是学化学的，做细胞实验属于门外汉的那一种。。 想做细胞爬片染荧光之后去看共聚焦，但是做了几次都出现如照片所示的奇怪的东西，实在分析不出来是哪做错了，还请大家指点。。 实验步骤如下： 1.24孔板放了圆形盖玻片之后种板 2.第二天加材料，共培养24 h 3.除去培养基之后，PBS洗两次，加入4%的多聚甲醛固定 4.压过的超纯水洗两次，PBS洗一次之后染线粒体，37度20 min 5.PBS洗三次之后染核，用的是DAPI，室温5 min 6.PBS洗三次把盖玻片取出，扣在滴了一滴抗荧光猝灭封片液的载玻片上 7.荧光显微镜观察，明场下就能看到如照片中所示的情况 直接看片子时可以看到有照片中那样情况的地方是白蒙蒙的，只有透亮的地方才能看到干净的细胞，白蒙蒙的地方就像是细胞被什么压住了一样，融为一体了，调焦也不能把这个像金针菇一样的东西和压在下面的细胞区分开，这样我每一个片子上就只有一小块细胞是能看的，其他都被这个金针菇压住了，很是费解，不知道是哪做错了。。。 爬片爬的心都要碎了，总是做不好，还请大家指点。。 虽然盖玻片和载玻片没有酸洗灭菌，但是似乎不是他们的原因，我把盖玻片扣到滴了一滴PBS的载玻片上在镜下看没有金针菇。。 不用封片液，直接扣盖玻片到载玻片上却还是有金针菇。。。 请大家帮我分析一下原因，说的太啰嗦了，实在是搞不定。。求助。。求救。。   20130923_133354.jpg  20130923_141458.jpg |
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hl16010921
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盐溶了再照的。要是倒置的共聚焦倍数不高的话也可以直接在孔里看。
10楼2013-09-29 20:49:52
conanzzz
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2楼2013-09-23 17:24:20
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conanzzz
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4楼2013-09-24 00:13:42