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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 重组质粒测序有点突变，这样的重组质粒还能用吗？
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许三多

木虫 (著名写手)

[求助] 重组质粒测序有点突变，这样的重组质粒还能用吗？

各位高人请帮忙！！
我用pET-22b(+)构建重组质粒，做原核表达。测序结果回来，发现有两个点突变，并且相应的氨基酸也变了，如图红色方框。
这样的情况，我重组的质粒还能用吗？
或者，能否有办法来判断下，突变后的蛋白结构的变化有多大吗？
重组质粒测序有点突变，这样的重组质粒还能用吗？
4.png
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1楼 2013-09-22 00:25:37
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
许三多: 金币+5, ★有帮助 2013-09-22 18:17:21
引用回帖:
7楼: Originally posted by 许三多 at 2013-09-22 11:39:01
这两个位点中，有一个在以前的测序中出现过的。我能否认为，这不是酶的问题，是我模板变化的原因呢？...

这很有可能，两个突变，一个来自于模板。
赞一下(1人) 回复此楼
植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
11楼2013-09-22 16:43:46
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查看全部 12 个回答

starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-09-22 08:13:19
许三多: 金币+5, ★有帮助 2013-09-22 11:38:45
这种情况就重新构建吧，你无法确定氨基酸变化是否对蛋白的结构与功能产生影响
赞一下 回复此楼
植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
3楼2013-09-22 05:41:52
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
许三多: 金币+10, ★有帮助 2013-09-22 10:52:58
这种刚好少一个氨基酸的比较少见啊,一般如果是构建质粒时候出错都是出现frame shift或者某个点突变
你这个比对的是构建质粒前和构建质粒后的序列吗
还是就是把你质粒的序列和数据库进行比对
有的蛋白有不同的isoform,可能你这个就刚好是另一种isoform,不影响功能的
建议你再仔细查查数据库,有没有其他isoform
赞一下(1人) 回复此楼
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
4楼2013-09-22 08:15:25
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许三多

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2013-09-22 08:15:25
这种刚好少一个氨基酸的比较少见啊,一般如果是构建质粒时候出错都是出现frame shift或者某个点突变
你这个比对的是构建质粒前和构建质粒后的序列吗
还是就是把你质粒的序列和数据库进行比对
有的蛋白有不同的iso ...

你好，非常谢谢你的回复。
是这样子的，我是拿的构建后的目的片段比对的，据库里序列就是我提交的。
我也再按照你说的去找找看，但愿会如你所说吧。
谢谢
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5楼2013-09-22 10:57:08
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