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后悔无期金虫 (小有名气)
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扩内含子
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| 有完整的CDS区大约1000bp，想要扩内含子，分三段，分两段都试过，设计了好多对引物就是扩不出条带！巣式PCR也做了，扩出来的条带不是想要的！ 在数据库中也找不到其他物种该基因的DNA序列！ 我该如何是好，请大侠们指点！多谢 |
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lixg
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【答案】应助回帖
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gyesang: 回帖置顶 2013-10-12 12:20:59
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1.内含子存在于基因组DNA中，因此必须以基因组DNA为模板扩增。 2.在cDNA的5‘端和3’端设计一对引物，争取1次就将包含内含子的基因序列扩增出来。 3.尝试一下不同的退火和延伸时间，因为你并不知道你的基因的序列长度。 4.如果用fermentas的超保真酶扩增的话，延伸时间设定依据是：2kb/min 仅供参考。 |
4楼2013-09-29 08:46:45
王希望
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6楼2013-10-16 09:50:45
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