应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 一个4kb水稻基因的全长cDNA拉不出来!!求指教！
181/2返回列表12下一页
查看: 1896  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

昺昺

木虫 (小有名气)

[求助] 一个4kb水稻基因的全长cDNA拉不出来!!求指教！

各位大虾，我有一个水稻中的4kb的基因，想把它的全长cDNA拉出来，在RGAP这个数据库中查到它本身的表达水平很低，用尽了各种方法、各种高保真酶，效果都不好，烦请高手不吝指教一二！十分感谢！
  拼接的方法我也用过，分三段都能P出相应大小的片段，但混在一起P就不行了
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

核酸生物学实验经验

» 猜你喜欢
太阳出来，星星要走。
1楼 2013-09-21 08:00:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Fleaves

至尊木虫 (著名写手)
我也是啊！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
回复此楼
2楼2013-09-21 09:48:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

昺昺

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Fleaves at 2013-09-21 09:48:54
我也是啊！

你用过那些方法和高保真酶啊？
我们一起等高人指点吧
赞一下 回复此楼
太阳出来，星星要走。
3楼2013-09-21 10:00:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-21 15:12:28
昺昺: 金币+1, ★有帮助 2013-09-21 18:01:44
“拼接的方法我也用过，分三段都能P出相应大小的片段，但混在一起P就不行了。”那么可能可能是因为混在一起时的三段的引物之间形成了二聚体，所以PCR不出来。
赞一下 回复此楼
4楼2013-09-21 10:27:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

amisking: 回帖置顶 2013-09-21 17:46:09
内容已删除
赞一下 回复此楼
5楼2013-09-21 11:09:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wahogui

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-21 15:12:41
昺昺: 金币+1, ★有帮助 2013-09-21 18:01:53
你可以找公司合成
赞一下 回复此楼
6楼2013-09-21 13:34:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
昺昺: 金币+1, ★有帮助 2013-09-21 18:02:02
Takara的Primary star 楼主用过吗？overlapping在一块可以吗?
赞一下 回复此楼
jiayoubashaonian
7楼2013-09-21 15:43:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

昺昺

木虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by blackrose8089 at 2013-09-21 15:43:59
Takara的Primary star 楼主用过吗？overlapping在一块可以吗?

谢谢！我用过了，效果不好啊
赞一下 回复此楼
太阳出来，星星要走。
8楼2013-09-21 18:00:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
昺昺: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-09-21 21:23:40
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-23 09:51:11
可以尝试找一下目的片段内部有哪些酶切位点，在这个位置设置分段，然后用连接酶连在一起。
赞一下 回复此楼
9楼2013-09-21 21:12:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

昺昺

木虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by wangpeng227 at 2013-09-21 21:12:16
可以尝试找一下目的片段内部有哪些酶切位点，在这个位置设置分段，然后用连接酶连在一起。

非常感谢！就是直接对PCR产物进行T4连接吗？有没有具体的参考文献之类的，多谢！
赞一下 回复此楼
太阳出来，星星要走。
10楼2013-09-21 21:24:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 昺昺 的主题更新
181/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？ +4 wangyl_123 2026-10-10 8/400 2026-10-12 18:09 by wangyl_123
[硕博家园] 极限拉扯，如何抉择 +5 Isak0320 2026-10-12 7/350 2026-10-12 18:03 by 有人要害朕
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么？ +3 好运来～9527 2026-10-10 6/300 2026-10-12 14:55 by 简单化xn
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷！
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
[有机交流] 各位大佬，路线设计求助 +6 zapen 2026-10-08 8/400 2026-10-10 15:59 by zapen
[基金申请] 入职后第一次管课题组的专利缴费，对账才发现官费比别人多掏了一倍 +5 13108017953 2026-10-08 5/250 2026-10-10 11:15 by wdwd123
[有机交流] 我应该选哪条合成路线让实验成功率高一些？ +5 jing816y 2026-10-08 9/450 2026-10-10 09:05 by zapen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭