10楼: Originally posted by lmcyjxs at 2013-09-22 21:19:07
楼主说酶含有内含子？？你是想说你要扩的基因含有内含子吧？假如你要扩的序列是已知的，即有完整的CDS区，那么，引物很好设计，直接CDS区两端写应该都可以扩出来的，如果你的是未知的，那么你就要做RACE，如楼上有朋 ...

9楼: Originally posted by 崔永霞 at 2013-09-22 14:30:10
需要设计很多对引物是什么意思啊？...

5楼: Originally posted by laojiu9878 at 2013-09-22 09:45:41
做简并引物，还是已经有序列直接扩；不同的注意点不同，要多考虑，或者查文献看别人是否设计过

10楼: Originally posted by lmcyjxs at 2013-09-22 21:19:07
楼主说酶含有内含子？？你是想说你要扩的基因含有内含子吧？假如你要扩的序列是已知的，即有完整的CDS区，那么，引物很好设计，直接CDS区两端写应该都可以扩出来的，如果你的是未知的，那么你就要做RACE，如楼上有朋 ...

14楼: Originally posted by 崔永霞 at 2013-09-25 20:42:42
我是在CDS的两端设计的上下游引物啊，分别跨过了起始密码子和终止密码子，可是还是扩不出来啊？我也不不知道原因是什么？我是以DNA为模板的，是不是不应该是以DNA为模板啊？应该是提RNA，然后反转录，再然后以CNA为 ...

15楼: Originally posted by lmcyjxs at 2013-09-26 17:07:52
可以以DNA为模板，你的扩增体系及程序有无问题呢？你的退火温度各方面是否合适？你怀疑引物有问题，那好办，交给生工或其他一些公司，让专业的人帮你设计，免费的。...

16楼: Originally posted by 崔永霞 at 2013-09-27 12:41:05
那以DNA 为模板的话，我设计的引物是不是很有可能被内含子隔断啊，我做的这个酶是植物中的，而且这种植物的基因组到现在还没有公布？...

18楼: Originally posted by 沙门小rna at 2013-09-27 14:50:18
引物设计是很重要，但是你也要看看你的引物和pcr其他组分是不是有问题。还应该在pcr条件上做调节。梯度温度试试没有？你是用什么软件设计的？

19楼: Originally posted by 崔永霞 at 2013-09-28 11:43:36
梯度温度也试过了，我是用primer5设计的。...