| 查看: 794 | 回复: 8 | |||
静安jingan铁杆木虫 (职业作家)
|
[求助]
酵母表达
|
| 有木有人做酵母表达的啊，本人初接触，好多疑问啊 |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有240人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - MolEPI: 44
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2119.9
- 散金: 10
- 红花: 209
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
2楼2013-09-19 21:13:12
静安jingan
铁杆木虫 (职业作家)
- 应助: 86 (初中生)
- 贵宾: 0.932
- 金币: 9295.7
- 散金: 2894
- 红花: 43
- 沙发: 28
- 帖子: 4233
- 在线: 1412.1小时
- 虫号: 2005883
- 注册: 2012-09-16
- 性别: MM
- 专业: 免疫相关疾病其他科学问题
3楼2013-09-19 21:59:55
anyaxiong
铁杆木虫 (知名作家)
- 应助: 61 (初中生)
- 金币: 8751.8
- 散金: 2291
- 红花: 26
- 沙发: 63
- 帖子: 8730
- 在线: 743.1小时
- 虫号: 974100
- 注册: 2010-03-17
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
4楼2013-09-20 08:51:12
静安jingan
铁杆木虫 (职业作家)
- 应助: 86 (初中生)
- 贵宾: 0.932
- 金币: 9295.7
- 散金: 2894
- 红花: 43
- 沙发: 28
- 帖子: 4233
- 在线: 1412.1小时
- 虫号: 2005883
- 注册: 2012-09-16
- 性别: MM
- 专业: 免疫相关疾病其他科学问题
5楼2013-09-20 09:03:33
anyaxiong
铁杆木虫 (知名作家)
- 应助: 61 (初中生)
- 金币: 8751.8
- 散金: 2291
- 红花: 26
- 沙发: 63
- 帖子: 8730
- 在线: 743.1小时
- 虫号: 974100
- 注册: 2010-03-17
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
静安jingan: 金币+20, ★★★很有帮助, 所有的流程都说到了，目前就是要就每一步细化了解过程 2013-09-20 15:02:12
静安jingan: 金币+20, ★★★很有帮助, 所有的流程都说到了，目前就是要就每一步细化了解过程 2013-09-20 15:02:12
| 酵母培养基有两种：固体和液体，固体的用来活化菌株或者筛选阳性克隆，液体培养基使得活化后的酵母大量繁殖，进而表达目的蛋白。还有筛选的时候要根据表达质粒的抗性添加相应的抗生素。一般的程序是这样子的：根据目的基因选择质粒和宿主，质粒构建（含有目的基因、酶切位点、分泌信号（可选）、抗性基因和标签），质粒转化进大肠杆菌，质粒提取，宿主感受态的制备，转化进选好的宿主酵母（质粒分单拷贝和多拷贝，单拷贝需要线性化，多拷贝在转化时不用酶切），重组子筛选，酵母基因组提取，PCR鉴定阳性克隆，小试表达目的蛋白，目的蛋白鉴定（SDS-PAGE和WB），表达条件优化（摇瓶小试的优化因素可以选择比较重要的几种：如温度，pH，诱导底物浓度、诱导时间（诱导开始时间和时续时间，补料方式一般为间歇性补料）），发酵罐发酵获得大量目的蛋白，蛋白纯化与鉴定，活性测定。 |
6楼2013-09-20 11:08:37
anyaxiong
铁杆木虫 (知名作家)
- 应助: 61 (初中生)
- 金币: 8751.8
- 散金: 2291
- 红花: 26
- 沙发: 63
- 帖子: 8730
- 在线: 743.1小时
- 虫号: 974100
- 注册: 2010-03-17
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
7楼2013-09-20 17:47:26
laojiu9878
至尊木虫 (文坛精英)
九牛
- 应助: 60 (初中生)
- 金币: 31861.6
- 红花: 3
- 帖子: 10261
- 在线: 236.4小时
- 虫号: 617287
- 注册: 2008-10-05
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
8楼2013-09-22 09:43:33
静安jingan
铁杆木虫 (职业作家)
- 应助: 86 (初中生)
- 贵宾: 0.932
- 金币: 9295.7
- 散金: 2894
- 红花: 43
- 沙发: 28
- 帖子: 4233
- 在线: 1412.1小时
- 虫号: 2005883
- 注册: 2012-09-16
- 性别: MM
- 专业: 免疫相关疾病其他科学问题
9楼2013-09-22 09:45:54
10