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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 易错PCR出现棕褐色沉淀 用怎样的Mn2+试剂可靠 浓度范围大概多少？
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海尤希

新虫 (小有名气)

[求助] 易错PCR出现棕褐色沉淀 用怎样的Mn2+试剂可靠 浓度范围大概多少？

各位有经验的师兄师姐们：
         最近在做易错PCR，准备先通过添加Mn2+来做一做，文献中控制的Mn2+浓度大概在0.1~0.5mmol/L，我这次做的条件如下。
         模版50ng，dNTP 0.2mmol/L each，10*PCR buffer（Takara Mg2+plus）5ul，MnCl2（梯度：0、0.05、0.1、0.2、0.3mmol/L），Taq 2U。94℃  5min，94℃ 40s，52℃ 1min，72℃ 2min 50s 循环30次，72℃ 18min，4℃。
         结果时：未加Mn2+ 条带正确，其余的均没有条带。而且发现P完之后，PCR小管底部出现明显的棕褐色沉淀，此现象正常吗？？？这也太不靠谱了吧！
         此次用的MnCl2是自己利用实验室分析纯的MnCl2·4H2O（储液5mmol/L） 配的，是不是达不到PCR的纯度，是不是非得用公司的试剂盒。我觉得易错PCR应该没那么难成功吧感觉文献中都说的很简单啊，我还是想自己先试试，求各位指点迷津!!!!!!!!!!!!!
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冷静、加油。
1楼 2013-09-17 21:34:37
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海尤希

新虫 (小有名气)
补充一下！ 我配的MnCl2没有灭菌，就是用无菌水溶解后过了滤膜，大家快来帮忙啊！
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冷静、加油。
2楼2013-09-17 21:44:17
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海尤希

新虫 (小有名气)
各位师兄师姐，你们在哪里啊！！！！！！！
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冷静、加油。
3楼2013-09-17 22:02:54
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海尤希

新虫 (小有名气)
再补充一下，目的片段长约2000bp，是不是不适合用易错PCR啊，不懂，凌乱了！
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冷静、加油。
4楼2013-09-17 22:33:11
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seraphlx

新虫 (初入文坛)
我也出现褐色条带了，不知道为啥，我连滤膜也没用
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5楼2015-10-08 20:04:20
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