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易错PCR出现棕褐色沉淀 用怎样的Mn2+试剂可靠 浓度范围大概多少？
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各位有经验的师兄师姐们： 最近在做易错PCR，准备先通过添加Mn2+来做一做，文献中控制的Mn2+浓度大概在0.1~0.5mmol/L，我这次做的条件如下。 模版50ng，dNTP 0.2mmol/L each，10*PCR buffer（Takara Mg2+plus）5ul，MnCl2（梯度：0、0.05、0.1、0.2、0.3mmol/L），Taq 2U。94℃ 5min，94℃ 40s，52℃ 1min，72℃ 2min 50s 循环30次，72℃ 18min，4℃。 结果时：未加Mn2+ 条带正确，其余的均没有条带。而且发现P完之后，PCR小管底部出现明显的棕褐色沉淀，此现象正常吗？？？这也太不靠谱了吧！ 此次用的MnCl2是自己利用实验室分析纯的MnCl2·4H2O（储液5mmol/L） 配的，是不是达不到PCR的纯度，是不是非得用公司的试剂盒。我觉得易错PCR应该没那么难成功吧感觉文献中都说的很简单啊，我还是想自己先试试，求各位指点迷津!!!!!!!!!!!!! |
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