24小时热门版块排行榜    

查看: 2026  |  回复: 13

欧阳-90

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 崔t-o-p at 2013-09-13 18:08:56
就是跑PAGE,看目的条带大小的,我想请问你原核表达的融合蛋白,先破碎之后上清用硫酸铵沉淀富积,这个方法可行吗?
  我之前尝试过破碎后,目的蛋白在沉淀里,上清几乎很少。我的目的是需要有活性的蛋白,越纯越好 ...

第一:只凭PAGE条带大小确定目的蛋白不准确,因为我遇见过很多次。除非是能做对照,看到条带粗细有明显变化。
第二:破碎之后用硫酸铵富集我做过比较少。但是有一个蛋白我就是这样做的。虽然是重组蛋白,但是我那个蛋白没有标签,是用硫酸铵富集后再过离子交换的。
11楼2013-09-17 14:04:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

同东中郎将

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

220KD蛋白分子偏大,不建议用原核表达体系做,就算表达了也是包涵体的可能性比较大。
曾子曰:“士不可以不弘毅,任重而道远。仁以为己任,不亦重乎?死而后已,不亦远乎?”
12楼2013-09-17 14:24:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangbighui

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你先要提高蛋白产量后再进行纯化,目的蛋白产量不高无论怎么样的纯化方法产率都不高,而且杂蛋白会很高。毒蛋白就会对细胞有毒性吧,你可以看看PET表达手册,找一个可以高产可溶毒蛋白的表达菌。然后进行表达优化,最后进行亲和纯化。
成功,就是成为你想成为的人
13楼2013-09-17 15:17:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

崔t-o-p

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 木_塚 at 2013-09-13 23:55:01
得到该蛋白的基因,将其拼接在强启动子下,使其overexpress,然后在用层析就好了。

你好,请问过表达是不是专门用过表达的载体?过表达只能在真核细胞转染上利用吗?这方面我没有接触过,还请你帮忙解释一下。。。万分感谢
14楼2013-09-18 09:50:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 崔t-o-p 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 什么时候开奖? +4 CrisMessi 2026-08-18 4/200 2026-08-19 00:53 by gatelove
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +3 瞬息宇宙 2026-08-15 3/150 2026-08-18 21:40 by xiaohuixin
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 9/450 2026-08-18 20:09 by 奶牛小黑
[基金申请] 朋友圈看到的 +4 wangzilk 2026-08-18 5/250 2026-08-18 19:25 by wangzilk
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +51 医学老男孩 2026-08-13 110/5500 2026-08-18 19:07 by icerianxia
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +8 基诺咪客 2026-08-17 11/550 2026-08-18 17:13 by 悠然熊猫
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +13 Ldrop2023 2026-08-13 16/800 2026-08-18 12:25 by 淀粉搬运工
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +4 Tide man 2026-08-14 5/250 2026-08-18 11:35 by Tide man
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +8 wangze12014 2026-08-14 10/500 2026-08-17 17:05 by xter9665
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
信息提示
请填处理意见