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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 毕赤酵母工程菌怎么活化
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yaneryouyan

木虫 (正式写手)

[求助] 毕赤酵母工程菌怎么活化

现有毕赤酵母工程菌存于安瓿管中（冻干粉状态）。现在需要对其活化，请问怎么进行活化？ 如何得到单菌落？得到单菌落后是否就可以接种到培养基中进行发酵培养了？毕赤酵母如何做镜检观察？
我是微生物方面的新人，还请不吝赐教！谢谢！
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1楼 2013-09-11 16:37:12
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feixue429

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+4, 鼓励热心应助！ 2013-09-12 10:37:52
不同的保存方法有不同的活化方法：
1.真空冷冻干燥法保存菌种在复苏时先用70%酒精棉花擦拭安瓿上部，将安瓿管顶部烧热， 用无菌棉签沾冷水，在顶部擦一圈，顶部出现裂纹，用挫刀或镊子颈部轻叩一下，敲下已开裂的安瓿管的顶端，用无菌水或培养液溶解菌块，使用无菌吸管移入新鲜培养基上，进行适温培养；  
2.  -80℃ 冰箱冻结法保存菌种复苏时，从冰箱中取出安瓿管或塑料冻存管，应立即放置38℃-40℃水浴中快速复苏并适当快速摇动。直到内部结冰全部溶解为止，约需50秒-100秒。开启安瓿管或塑料冻存管，将内容物移至适宜的培养基上进行培养   
3. 液氮超低温冻结法保存菌种复苏与-80℃ 冰箱冻结法保存菌种复苏相似，从液氮罐中取出安瓿管或塑料冻存管，应立即放置在38℃-40℃水浴中快速复苏并适当摇动。直到内部结冰全部溶解为止，一般约需50秒-100秒。开启安瓿管或塑料冻存管，将内容物移至适宜的培养基上进行培养。
一般菌种活化需要以下几个步骤：   
第一配置菌种适宜生长的培养。
第二将菌种从保藏状态恢复到室温状态，比如将冷冻的菌种解冻。   
第三将通过操作将保藏的菌种接种到培养基中培养，此步骤称为菌种复壮。   
第四步挑选培养基茁壮的菌落，挑选其中部分菌落接种到新的培养基中培养，重复此步骤2-3次，从而得到生长良好的菌落。
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地球很危险，我们赶紧回火星吧……
2楼2013-09-11 17:16:14
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wmwnyxt

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+3, 鼓励应助！ 2013-09-12 10:38:08
yaneryouyan: 金币+20, ★★★★★最佳答案, 很有帮助，很认真的告诉我方法。谢谢 2013-09-12 11:13:32
1.先取少量干粉于摇瓶培养。
2.稀释涂布。
3.取单菌落划线。培养基用YPD即可。
或你也可以将干粉悬浮于生理盐水中，而后培养基上涂布，再取单菌落划线。
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Ifyouwanttocatchupwiththepaceoflife,youshouldfullfillyourselfatfirst
3楼2013-09-11 17:18:25
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yaneryouyan

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wmwnyxt at 2013-09-11 17:18:25
1.先取少量干粉于摇瓶培养。
2.稀释涂布。
3.取单菌落划线。培养基用YPD即可。
或你也可以将干粉悬浮于生理盐水中，而后培养基上涂布，再取单菌落划线。

请问一下，有说1）安管的开封：a用浸过70%酒精的脱脂棉擦净安管；b用火焰将安管顶端加热；c滴无菌水至加热的安管顶端使玻璃开裂；d用锉刀或镊子敲下已开裂的安管顶端。2）菌株恢复培养：a用无菌吸管吸取0.3-0.4ml适宜的液体培养基，滴入安管内轻轻振荡，使冻干菌体溶解成悬浮状。b取约0.2ml菌体悬液移植于指定的琼脂斜面或平板培养基，剩余的菌液注入指定的液体培养基内（3-4ml），在建议温度下培养。
   将菌悬液移植到培养基上就可以了吗？这个培养基可以是YPD培养基吗？另外剩余菌液注入制定的液体培养基内，这个有什么用处的，或者以后有要用到吗？另外什么时候做稀释涂布呢？
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4楼2013-09-12 10:29:16
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wmwnyxt

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yaneryouyan at 2013-09-12 10:29:16
请问一下，有说1）安管的开封：a用浸过70%酒精的脱脂棉擦净安管；b用火焰将安管顶端加热；c滴无菌水至加热的安管顶端使玻璃开裂；d用锉刀或镊子敲下已开裂的安管顶端。2）菌株恢复培养：a用无菌吸管吸取0.3-0.4ml适 ...

1.菌悬液最好还是在平板上涂布下，以形成单菌落。
2.这个培养基可以是YPD，30度培养即可。
3.剩余的菌液培养，这个应该是扩培，以免你涂布不成功。扩培之后镜检下，若是没染菌，就制成甘油管冻存，或是再制成冻干粉保存吧。
4.稀释涂布一般是你用液体培养基扩配后再做。
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5楼2013-09-12 11:07:28
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yaneryouyan

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wmwnyxt at 2013-09-12 11:07:28
1.菌悬液最好还是在平板上涂布下，以形成单菌落。
2.这个培养基可以是YPD，30度培养即可。
3.剩余的菌液培养，这个应该是扩培，以免你涂布不成功。扩培之后镜检下，若是没染菌，就制成甘油管冻存，或是再制成冻干 ...

谢谢啊！麻烦你了！
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6楼2013-09-12 11:12:02
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mangagewiae

新虫 (初入文坛)
第一次接触酵母..请问扩培要怎么做，关于活化有具体的操作步骤吗，谢谢
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7楼2015-05-20 15:12:07
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