| 查看: 1219 | 回复: 7 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
seasonin银虫 (小有名气)
|
[求助]
蛋白相互作用，钓取受体
|
|
|
我想用带his-tag的蛋白钓出细胞膜上的相应受体，也就是研究蛋白之间的相互作用，准备用his-pulldown，目前有纯化的蛋白，已经透析至水中，还有提好的细胞膜，细胞膜提取是用的生工的试剂盒，里面有DTT和蛋白酶抑制剂。 目前我有预装的纯化柱，我准备把纯化好的蛋白重新上NI柱，或者把柱子里的填料取出来（以便后面与膜蛋白孵育），我想应该是用buffer把填料处理，然后用纯化的蛋白与填料孵育，buffer洗几遍后离心收集珠子，然后在用细胞膜与柱子孵育，再用含有500mM咪唑的buffer洗几遍后离心收集珠子，最后用SDS-PAGE的上样buffer与珠子混合，煮沸离心取上清点样吧 目前有几个疑惑，希望能够得到指点 1.都说pulldown的假阳性高，那我该怎么设置对照呢？ 2.关于处理填料的buffer有没有什么参考呢？ 3.能不能提供一些实验中需要注意的细节呢？ 再次表示感谢 |
回复此楼» 猜你喜欢
论文终于录用啦！满足毕业条件了
已经有13人回复
-
2025年遐想
已经有5人回复
-
投稿Elsevier的杂志（返修），总是在选择OA和subscription界面被踢皮球
已经有8人回复
-
求个博导看看
已经有18人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 蛋白质之间相互作用的研究方法有哪些？
已经有3人回复
- 纯化抗体的两个问题
已经有19人回复
- 圆二色谱对分析蛋白质相互作用有帮助吗
已经有5人回复
- 【求助】如何探究两个蛋白质之间的直接或间接相互作用？谢谢！
已经有6人回复
- 信号分子
已经有27人回复
- 求助--两个蛋白之间的相互作用的试验方法
已经有4人回复
- 如何验证RNA是否与蛋白质发生相互作用？
已经有8人回复
- 求蛋白质相互作用研究方法...
已经有12人回复
- 【求助/交流】请教高人：GST-pull down找出B蛋白和A蛋白相互作用，下游实验要怎么做啊
已经有4人回复
sun_in_night
木虫 (小有名气)
- 应助: 51 (初中生)
- 金币: 1706.7
- 红花: 11
- 帖子: 171
- 在线: 123.1小时
- 虫号: 1494034
- 注册: 2011-11-16
- 性别: GG
- 专业: 植物遗传学
7楼2013-11-22 13:23:33