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hymuanguing

新虫 (初入文坛)

[求助] 提取椎间盘髓核组织RNA,A260/208<1.5,A230峰值远高于A260、A280峰值,

我提取椎间盘髓核组织RNA,使用的是天根的试剂盒TRNzolA+总RNA提取试剂,结果很是奇怪:A260/208<1.5,A230峰值远高于A260、A280峰值,(见图片)。
   然后我换用同学的小鼠肺组织,使用同一试剂盒提取RNA,等到的结果就比较理想:A260/208在1.7-1.8之间。
    所以我推断是自己椎间盘髓核组织的问题。椎间盘髓核组织富含蛋白多糖和纤维成分,髓核细胞分散在细胞间质内,细胞数量比较少。不过我查阅相关文献,前辈们也是使用 Trizol 等提取总RNA的试剂成功提取了髓核细胞的RNA。  到这里就不行了。
    想请教的是:1、是否需要更换提取RNA的试剂盒(例如Invitrogen 的 TRizol ,或者是提取组织微量RNA的相关试剂盒等)?

                         2、如果不更换试剂盒的话,该如何优化实验呢,椎间盘髓核组织是否需要特殊处理呢?

                        3、或者还有什么其他方法,希望大家多给提提意见!
提取椎间盘髓核组织RNA,A260/208<1.5,A230峰值远高于A260、A280峰值,
截图01.20130908.png


提取椎间盘髓核组织RNA,A260/208<1.5,A230峰值远高于A260、A280峰值,-1
截图04.20130908.png
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hymuanguing

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by lbd218 at 2013-09-13 11:34:44
楼主问题解决了么?是怎么解决的?是不是RNA沉淀过程中,蛋白液同时沉淀了,干扰特别严重。我也遇到这问题了,方法肯定没问题,估计是提取过程中的某个环节出错

我的问题还没有解决呢个,论坛里还想也没有得到解决方法啊。我的组织中还有很多蛋白多糖而细胞含量相对较少。操作出错的可能性不大。正发愁呢,你也遇到我这样的问题了吗
9楼2013-09-13 12:19:37
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-09 20:13:52
A280是检测样品中的蛋白含量,不是208,A260/280低说明蛋白残余比较多,可能与样品组织中蛋白含量高有关。A230高说明样品中的有机物多。TRIZOL是含酚的缓冲液,洗涤时还要用到乙醇,LZ的样品A230过高有可能是操作上的问题。有时候核酸样品浓度低也可能造成痕量有机试剂对A260/230影响很大。
2楼2013-09-08 23:53:58
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hymuanguing

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-09-08 23:53:58
A280是检测样品中的蛋白含量,不是208,A260/280低说明蛋白残余比较多,可能与样品组织中蛋白含量高有关。A230高说明样品中的有机物多。TRIZOL是含酚的缓冲液,洗涤时还要用到乙醇,LZ的样品A230过高有可能是操作上 ...

如果是“核酸样品浓度低也可能造成痕量有机试剂对A260/230影响很大” ,那有什么好的解决方法吗
3楼2013-09-09 09:30:35
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by hymuanguing at 2013-09-09 09:30:35
如果是“核酸样品浓度低也可能造成痕量有机试剂对A260/230影响很大” ,那有什么好的解决方法吗...

用适量的初始材料提取有助于改善最终样品的质量。关键还是提取过程要小心,尽量不要吸到有机试剂部分。洗涤后尽量把乙醇挥发干净。
4楼2013-09-09 13:25:20
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