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hymuanguing

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[求助] 提取椎间盘髓核组织RNA，A260/208＜1.5，A230峰值远高于A260、A280峰值,

我提取椎间盘髓核组织RNA，使用的是天根的试剂盒TRNzolA+总RNA提取试剂，结果很是奇怪：A260/208＜1.5，A230峰值远高于A260、A280峰值,（见图片）。
然后我换用同学的小鼠肺组织，使用同一试剂盒提取RNA，等到的结果就比较理想：A260/208在1.7-1.8之间。
所以我推断是自己椎间盘髓核组织的问题。椎间盘髓核组织富含蛋白多糖和纤维成分，髓核细胞分散在细胞间质内，细胞数量比较少。不过我查阅相关文献，前辈们也是使用 Trizol 等提取总RNA的试剂成功提取了髓核细胞的RNA。  到这里就不行了。
想请教的是：1、是否需要更换提取RNA的试剂盒（例如Invitrogen 的 TRizol ,或者是提取组织微量RNA的相关试剂盒等）？

                     2、如果不更换试剂盒的话，该如何优化实验呢，椎间盘髓核组织是否需要特殊处理呢？

                     3、或者还有什么其他方法，希望大家多给提提意见！

截图01.20130908.png

提取椎间盘髓核组织RNA，A260/208＜1.5，A230峰值远高于A260、A280峰值,-1

截图04.20130908.png

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A260/A280和A260/A230的含义已经有19人回复

1楼2013-09-08 21:48:18

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cicelyzh

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【答案】应助回帖

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩。 2013-09-09 20:13:52

A280是检测样品中的蛋白含量，不是208，A260/280低说明蛋白残余比较多，可能与样品组织中蛋白含量高有关。A230高说明样品中的有机物多。TRIZOL是含酚的缓冲液，洗涤时还要用到乙醇，LZ的样品A230过高有可能是操作上的问题。有时候核酸样品浓度低也可能造成痕量有机试剂对A260/230影响很大。

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2楼2013-09-08 23:53:58

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hymuanguing

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引用回帖:

2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-09-08 23:53:58
A280是检测样品中的蛋白含量，不是208，A260/280低说明蛋白残余比较多，可能与样品组织中蛋白含量高有关。A230高说明样品中的有机物多。TRIZOL是含酚的缓冲液，洗涤时还要用到乙醇，LZ的样品A230过高有可能是操作上 ...

如果是“核酸样品浓度低也可能造成痕量有机试剂对A260/230影响很大” ，那有什么好的解决方法吗

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3楼2013-09-09 09:30:35

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