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cicicanfly

新虫 (初入文坛)

[求助] LDH检测相关~

南京建成的LDH试剂盒,检测细胞中LDH释放率
说明书提供了公式,一个是血清的一个是组织的,那么我想测细胞的需要用哪个呢?还是均用不上
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阿飞1990乖乖

荣誉版主 (职业作家)

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你好,请问你的问题解决了吗?我也买的南京建成LDH试剂盒,准备测细胞胞内和胞外的LDH活性。可说明书里关于细胞的具体步骤没有啊
物来顺应,未来不迎,当时不杂,既过不恋。
2楼2014-05-26 10:03:02
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陈锐鸿

银虫 (初入文坛)

乳酸脱氢酶(LDH)释放实验
(1)        HK-2细胞以2x105/孔浓度接种于24孔板;
(2)        实验前换无血清DMEM/F12培养液孵育24 h,使细胞同步于静止期;
(3)        当HK-2细胞生长至65%~75%融合时,弃上清液,加入含不同浓度AA( 0μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、160μg/ml)的无血清DMEM/F12培养液0.5ml;
(4)        孵育细胞48 h后,吸取培养上清入1.5ml Ep管中待测;
(5)        用冷PBS液清洗细胞2~3次,将冷2%TritonX-100 0.5 ml加入各孔中,反复冻融吹打3次使细胞充分破裂溶解;
(6)        吸取细胞裂解液入1.5ml Ep管中12000g(相当于12300ref)离心3min。取上清入另一1.5ml Ep管中。应用全自动生化分析仪检测该上清液LDH值(即细胞内的LDH值)和上述培养上清液中的LDH值;               
(7)        计算各组LDH释放率: LDH释放率(%)=上清液LDH值x 100/(细胞内LDH值十上清液LDH值)。
    我知道就这么多了,,如果你有更具体的麻烦你告知一下我
3楼2014-08-04 01:09:29
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陈锐鸿

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 阿飞1990乖乖 at 2014-05-26 10:03:02
你好,请问你的问题解决了吗?我也买的南京建成LDH试剂盒,准备测细胞胞内和胞外的LDH活性。可说明书里关于细胞的具体步骤没有啊

乳酸脱氢酶(LDH)释放实验
(1)        HK-2细胞以2x105/孔浓度接种于24孔板;
(2)        实验前换无血清DMEM/F12培养液孵育24 h,使细胞同步于静止期;
(3)        当HK-2细胞生长至65%~75%融合时,弃上清液,加入含不同浓度AA( 0μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、160μg/ml)的无血清DMEM/F12培养液0.5ml;
(4)        孵育细胞48 h后,吸取培养上清入1.5ml Ep管中待测;
(5)        用冷PBS液清洗细胞2~3次,将冷2%TritonX-100 0.5 ml加入各孔中,反复冻融吹打3次使细胞充分破裂溶解;
(6)        吸取细胞裂解液入1.5ml Ep管中12000g(相当于12300ref)离心3min。取上清入另一1.5ml Ep管中。应用全自动生化分析仪检测该上清液LDH值(即细胞内的LDH值)和上述培养上清液中的LDH值;               
(7)        计算各组LDH释放率: LDH释放率(%)=上清液LDH值x 100/(细胞内LDH值十上清液LDH值)。
    我知道就这么多了,,如果你有更具体的麻烦你告知一下我
4楼2014-08-04 01:09:46
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阿飞1990乖乖

荣誉版主 (职业作家)

优秀版主

引用回帖:
4楼: Originally posted by 陈锐鸿 at 2014-08-04 01:09:46
乳酸脱氢酶(LDH)释放实验
(1)        HK-2细胞以2x105/孔浓度接种于24孔板;
(2)        实验前换无血清DMEM/F12培养液孵育24 h,使细胞同步于静止期;
(3)        当HK-2细胞生长至65%~75%融合时,弃上清液,加入含不同浓度A ...

非常感谢!由于一直没有搞清楚具体步骤,这个实验一直拖到现在还没做,开学后打算做,希望多多交流
物来顺应,未来不迎,当时不杂,既过不恋。
5楼2014-08-04 05:39:26
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陈锐鸿

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 阿飞1990乖乖 at 2014-08-04 05:39:26
非常感谢!由于一直没有搞清楚具体步骤,这个实验一直拖到现在还没做,开学后打算做,希望多多交流...

我也是刚刚开始做的,做了几次了,先练练手。。呵呵
6楼2014-08-14 01:49:08
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