24小时热门版块排行榜    

查看: 2902  |  回复: 17
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

yanshuai511

铜虫 (小有名气)

[求助] 急!500kD 蛋白western 求助

最近在做血浆中apoB的western,大小是520kD,浓缩胶5%,分离胶7% (150V,5h),感觉分的还可以,可转膜(350mA,5h)老是有问题。压出来的条带也不是很好看。有没有人做过的,求指导一下?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yanshuai511

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-09-06 22:16:42
楼主说的如果是转移蛋白质到膜上的效率低,那么可以有如下解决方法(湿转):
1.转移缓冲溶液中加入终浓度为20%的甲醇溶液,甲醇可以降低蛋白质洗脱效率,但是增加蛋白质与NC膜的结合能力;甲醇可以防止凝胶变形; ...

你好!你说的转膜液里加0.1%的SDS,那为什么1L转膜液只加0.37
g呢?
18楼2013-11-11 19:58:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答

yanshuai511

铜虫 (小有名气)

急啊,没人做过吗?
2楼2013-09-04 22:00:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

忽而今秋

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你是转过了还是?做个预实验看看试试电压和时间。可以适当提高甲醇浓度。

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2013-09-05 00:12:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
在转膜液里加SDS可以帮助大蛋白转膜。此外条带不好看可能是变性不完全造成的,大蛋白变性比较困难,可以适当延长变性时间。
4楼2013-09-05 01:40:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见