| 查看: 3382 | 回复: 17 | |||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||||
yanshuai511铜虫 (小有名气)
|
[求助]
急！500kD 蛋白western 求助
|
||||
| 最近在做血浆中apoB的western，大小是520kD，浓缩胶5%，分离胶7% （150V，5h），感觉分的还可以，可转膜（350mA，5h）老是有问题。压出来的条带也不是很好看。有没有人做过的，求指导一下？ |
回复此楼» 猜你喜欢
氢氧化钾活化操作
已经有19人回复
-
散金
已经有68人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有272人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
-
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析
已经有0人回复
-
AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点
已经有0人回复
-
ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点
已经有0人回复
-
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？
已经有0人回复
-
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
-
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
-
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用
已经有0人回复
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - MolEPI: 44
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2119.9
- 散金: 10
- 红花: 209
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
yanshuai511: 金币+10, ★有帮助 2013-09-08 13:52:36
myprayer: 金币+3, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-10 10:48:21
yanshuai511: 金币+10, ★有帮助 2013-09-08 13:52:36
myprayer: 金币+3, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-10 10:48:21
|
楼主说的如果是转移蛋白质到膜上的效率低，那么可以有如下解决方法（湿转）： 1.转移缓冲溶液中加入终浓度为20%的甲醇溶液，甲醇可以降低蛋白质洗脱效率，但是增加蛋白质与NC膜的结合能力；甲醇可以防止凝胶变形；甲醇对于高分子蛋白质可延长转移时间。 2.转移缓冲溶液中加入终浓度为0.1%的SDS，理由在8楼我已经说过了。 3.使用小孔径的NC膜，孔径0.2um的膜。 4.使用戊二醛交联蛋白质。上样后可以用戊二醛交联膜上的蛋白质，这样蛋白质自身构成的网络与NC膜的纤维网络会彼此交叉构成约束，使得NC膜上的蛋白质不易被洗下来。 5.对于大分子量的蛋白质，转膜时电压要高一点，一般 恒压100V，限流400mA，时间也要延长一点，比3小时要长，开始最好也用两块膜，注意加强降温措施，在槽的一边放一块冰来降温。 6.适当增加转膜时间。 |
13楼2013-09-06 22:16:42
yanshuai511
铜虫 (小有名气)
- 应助: 13 (小学生)
- 金币: 302.6
- 散金: 13
- 红花: 4
- 帖子: 58
- 在线: 13小时
- 虫号: 1165383
- 注册: 2010-12-08
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
2楼2013-09-04 22:00:25
3楼2013-09-05 00:12:41
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
4楼2013-09-05 01:40:38
