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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » [求助/交流]如何提高自己DIY的柱式胶回收试剂盒的回收效率？
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2008101111

金虫 (正式写手)

学术江湖混子

[求助] [求助/交流]如何提高自己DIY的柱式胶回收试剂盒的回收效率？

最近自己搜集了柱式胶回收试剂盒各个溶剂的配方，经过几轮的试验，总算能够回收到PCR产物，但是回收的效率估计只有50%左右，敢问各位有没有好的建议和方法来提高一下回收效率？或者有更好的配方给我建议一下？
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自主创业者，捣腾生物试剂
1楼 2013-09-04 18:35:45
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-09-05 15:01:02
你的想法很好，估计没有人想到会自己DIY胶回收，能否分享出你的配方？
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-09-04 21:00:03
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2008101111

金虫 (正式写手)

学术江湖混子
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-09-04 21:00:03
你的想法很好，估计没有人想到会自己DIY胶回收，能否分享出你的配方？

配方还在试验中，目前效果不错，如果分享了配方，估计会招来试剂公司的恶骂了，哈哈哈
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自主创业者，捣腾生物试剂
3楼2013-09-04 21:13:11
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hl16010921

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-09-05 15:00:26
2008101111: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-10-14 22:19:44
我感觉楼主的回收效率已经很高了。但以前做的时候想到的提高效率的也就几个方面：1.溶胶。这一部分可以适当提高温度。2.上柱。由于是高盐结合，低盐洗脱，适当提高盐浓度应该有利（推测）3.洗脱。我以前一直用纯水洗脱而且一定要65到70摄氏度水浴，适当延长时间。估计这步是影响收率的关键。由于洗脱体积一般都很小30~50ul，柱心和边缘的洗脱效果是不同的，适当加大洗脱体积会提高总收率，但浓度下降。重复洗脱的作用是有的但不明显。能想到的就这些。仅供楼主参考。
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4楼2013-09-05 10:55:13
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
2008101111: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-09-05 11:33:44
2008101111(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-09-05 15:00:34
2008101111: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-10-14 22:20:28
这个可以么？
5.5 M guanidine thiocyanate (GuSCN)
20 mM Tris HCl pH 6.6
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5楼2013-09-05 11:06:38
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2008101111

金虫 (正式写手)

学术江湖混子
引用回帖:
5楼: Originally posted by Haibara_Ai at 2013-09-05 11:06:38
这个可以么？
5.5 M guanidine thiocyanate (GuSCN)
20 mM Tris HCl pH 6.6

再问一下，这个配方可是溶胶液的？可曾试验过了？
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自主创业者，捣腾生物试剂
6楼2013-09-05 11:18:29
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2008101111

金虫 (正式写手)

学术江湖混子
引用回帖:
4楼: Originally posted by hl16010921 at 2013-09-05 10:55:13
我感觉楼主的回收效率已经很高了。但以前做的时候想到的提高效率的也就几个方面：1.溶胶。这一部分可以适当提高温度。2.上柱。由于是高盐结合，低盐洗脱，适当提高盐浓度应该有利（推测）3.洗脱。我以前一直用纯水洗 ...

感谢建议，我进一步试验试试
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自主创业者，捣腾生物试剂
7楼2013-09-05 11:19:35
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)
★
2008101111(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-09-05 15:00:45
自己去openwetware看  这个是qiagen用得，不过自己配不如直接买成品buffer便宜，
GuSCN在sigma买一点都不便宜
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8楼2013-09-05 11:28:30
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2008101111

金虫 (正式写手)

学术江湖混子
引用回帖:
8楼: Originally posted by Haibara_Ai at 2013-09-05 11:28:30
自己去openwetware看  这个是qiagen用得，不过自己配不如直接买成品buffer便宜，
GuSCN在sigma买一点都不便宜

非常感谢你的建议
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自主创业者，捣腾生物试剂
9楼2013-09-05 11:32:31
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fanwq258

木虫 (正式写手)
胶回收柱怎么自己弄啊
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要么好好活，要么死，拒绝半死不活
10楼2013-09-05 18:00:21
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