24小时热门版块排行榜

>论坛更新日志 (3786)
>虫友互识 (718)
>文献求助 (261)
>导师招生 (232)
>论文投稿 (137)
>考博 (100)
>硕博家园 (97)
>教师之家 (71)
>基金申请 (69)
>博后之家 (63)
>休闲灌水 (57)
>公派出国 (52)
>考研 (50)
>招聘信息布告栏 (46)
>找工作 (36)
>论文道贺祈福 (34)

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

sherrysure

银虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 1117.5
帖子: 121
在线: 82.4小时
虫号: 1285648

[交流] 重组质粒转染后绿色荧光表达的很奇怪，附图，求大神解释~~感激不尽

重组质粒转染后绿色荧光表达的很奇怪，
和文献与别人做的差别很大，
我的荧光图都看不懂细胞形态，就是稀稀拉拉的云雾状，不知道是什么原因。
附图如下，求大神解释~~感激不尽
我用的载体是pEGFP-C2

20倍-8y-bl-木虫求助.jpg

40倍-10y-木虫求助.jpg

20倍-9p-木虫求助-明场.jpg

20倍-9y-木虫求助-明场对应.jpg

空载对照.JPG

[ Last edited by sherrysure on 2013-9-5 at 14:52 ]

回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

细胞生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

GFP重组表达质粒电泳问题已经有2人回复

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴

1楼 2013-09-03 16:06:34

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

hl16010921

木虫 (正式写手)

应助: 100 (初中生)
金币: 2218.4
帖子: 343
在线: 285.2小时
虫号: 2514830

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-09-06 13:16:37
sherrysure: 金币+5, 谢谢！ 2013-09-06 16:28:10

1.文章里的图一般都是拍了几张甚至几十张里挑最佳视野的结果。而且一般都修过。你适当减低曝光时间，会更清晰些。2.转染过程对细胞膜是有损伤的，有时损伤很大。这导致细胞形态改变很正常。特别是瞬时转染24h后就观察的有时细胞还没恢复。细胞传个代要贴壁也得几个小时吧。所以转染遇到这情况很正常。如果表达几天内稳定，可以适当让细胞恢复一下（推测）3.膜蛋白的过表达可能影响细胞形态。毕竟膜表面的粘附可能会受到影响。4.空载体对照和你的基因的区别不明显。分不清细胞质和细胞膜表达。你把曝光时间调小，让光弱些，换40倍镜试试.调焦再细心些。照片荧光不要太亮了，导致周围都有些绿色了（空载体明显）。5.建议使用染料染细胞膜。这样能使结果更清晰准确。6.有条件的可以试试激光共聚焦显微镜，会清晰很多（调焦要耐心。）总之，转进去了，表达了，现在只是拍照和处理图片的问题，别太担心。很可能转入这个基因就是这样的。