应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 重组质粒转染后绿色荧光表达的很奇怪，附图，求大神解释~~感激不尽
131/1返回列表
查看: 5620  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

sherrysure

银虫 (小有名气)

[交流] 重组质粒转染后绿色荧光表达的很奇怪，附图，求大神解释~~感激不尽

重组质粒转染后绿色荧光表达的很奇怪，
和文献与别人做的差别很大，
我的荧光图都看不懂细胞形态，就是稀稀拉拉的云雾状，不知道是什么原因。
附图如下，求大神解释~~感激不尽
我用的载体是pEGFP-C2


重组质粒转染后绿色荧光表达的很奇怪，附图，求大神解释~~感激不尽
20倍-8y-bl-木虫求助.jpg


重组质粒转染后绿色荧光表达的很奇怪，附图，求大神解释~~感激不尽-1
40倍-10y-木虫求助.jpg
重组质粒转染后绿色荧光表达的很奇怪，附图，求大神解释~~感激不尽-2
20倍-9p-木虫求助-明场.jpg
重组质粒转染后绿色荧光表达的很奇怪，附图，求大神解释~~感激不尽-3
20倍-9y-木虫求助-明场对应.jpg
重组质粒转染后绿色荧光表达的很奇怪，附图，求大神解释~~感激不尽-4
空载对照.JPG



[ Last edited by sherrysure on 2013-9-5 at 14:52 ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

细胞生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2013-09-03 16:06:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

hl16010921

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-09-06 13:16:37
sherrysure: 金币+5, 谢谢！ 2013-09-06 16:28:10
1.文章里的图一般都是拍了几张甚至几十张里挑最佳视野的结果。而且一般都修过。你适当减低曝光时间，会更清晰些。2.转染过程对细胞膜是有损伤的，有时损伤很大。这导致细胞形态改变很正常。特别是瞬时转染24h后就观察的有时细胞还没恢复。细胞传个代要贴壁也得几个小时吧。所以转染遇到这情况很正常。如果表达几天内稳定，可以适当让细胞恢复一下（推测）3.膜蛋白的过表达可能影响细胞形态。毕竟膜表面的粘附可能会受到影响。4.空载体对照和你的基因的区别不明显。分不清细胞质和细胞膜表达。你把曝光时间调小，让光弱些，换40倍镜试试.调焦再细心些。照片荧光不要太亮了，导致周围都有些绿色了（空载体明显）。5.建议使用染料染细胞膜。这样能使结果更清晰准确。6.有条件的可以试试激光共聚焦显微镜，会清晰很多（调焦要耐心。）总之，转进去了，表达了，现在只是拍照和处理图片的问题，别太担心。很可能转入这个基因就是这样的。
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2013-09-05 15:25:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你转染的是什么细胞？
赞一下 回复此楼
2楼2013-09-04 03:04:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sherrysure

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-09-04 03:04:51
你转染的是什么细胞？

HEK293细胞（哺乳动物人），载体连的是是本来与禽类动物互作的基因，会有影响吗？
赞一下 回复此楼
3楼2013-09-04 08:42:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mamadexiao

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-09-04 21:12:06
一个问题，你的蛋白是怎么分布的？细胞内，还是包膜啊？
赞一下 回复此楼
4楼2013-09-04 09:59:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sherrysure

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by mamadexiao at 2013-09-04 09:59:32
一个问题，你的蛋白是怎么分布的？细胞内，还是包膜啊？

是跨膜蛋白，细胞膜上的吧
赞一下 回复此楼
5楼2013-09-04 11:39:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hl16010921

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-09-04 15:23:35
给张明场的图吧。要不然看不清。好像绿色的荧光不在一个聚焦平面上（膜蛋白的话很正常。），再调一下焦，明场的细胞轮廓清晰，关灯，开激发，看荧光。把明场的图和荧光叠加就好了。有激光共聚焦显微镜的话，可以试试，能清晰不少。
赞一下 回复此楼
6楼2013-09-04 11:48:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sherrysure

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by hl16010921 at 2013-09-04 11:48:43
给张明场的图吧。要不然看不清。好像绿色的荧光不在一个聚焦平面上（膜蛋白的话很正常。），再调一下焦，明场的细胞轮廓清晰，关灯，开激发，看荧光。把明场的图和荧光叠加就好了。有激光共聚焦显微镜的话，可以试试 ...

谢谢！！图片已更新~
赞一下 回复此楼
7楼2013-09-04 12:10:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hl16010921

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-09-06 13:16:29
转染的细胞形态略有变化，好像有些变圆并突出，不像未转染的那么伸展。应该是正常现象。我合成了一下明场和荧光的图。从图上看转染效果还是不错的，你下次再微调一下焦距就更好了。另外调整一下对比和亮度，会更好些。
重组质粒转染后绿色荧光表达的很奇怪，附图，求大神解释~~感激不尽-5
123.jpg
赞一下 回复此楼
8楼2013-09-05 10:27:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sherrysure

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by hl16010921 at 2013-09-05 10:27:02
转染的细胞形态略有变化，好像有些变圆并突出，不像未转染的那么伸展。应该是正常现象。我合成了一下明场和荧光的图。从图上看转染效果还是不错的，你下次再微调一下焦距就更好了。另外调整一下对比和亮度，会更好些 ...

对的呢，我也很奇怪，发荧光的细胞基本上形态都不太好了。

我看文章里头的转染图片好像都没有我照的这样弥散状的呢，我又发了一张空质粒转染的图片，一般我看到的其他基因真核表达图片都是这样的。

是我的基因的问题吗？是入侵禽类的基因转染哺乳动物细胞的原因吗？
赞一下 回复此楼
9楼2013-09-05 14:53:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sherrysure

银虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by hl16010921 at 2013-09-05 15:25:08
1.文章里的图一般都是拍了几张甚至几十张里挑最佳视野的结果。而且一般都修过。你适当减低曝光时间，会更清晰些。2.转染过程对细胞膜是有损伤的，有时损伤很大。这导致细胞形态改变很正常。特别是瞬时转染24h后就观 ...

好的，谢谢你！那我摸索一下稳定转染，看看能不能拍出比较好的图片~
赞一下 回复此楼
11楼2013-09-06 16:28:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ronghua2013

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也用含GFP的重组质粒转染了HEK293细胞，奇怪的是，转染了重组质粒的细胞在荧光显微镜下可见90%左右的绿色荧光，而转空载体的却难以看见GFP荧光，偶然找到三五个荧光细胞，这是怎么回事？求大神指点，不甚感激。
赞一下 回复此楼
12楼2014-10-18 20:35:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

MarchZR

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
11楼: Originally posted by sherrysure at 2013-09-06 16:28:00
好的，谢谢你！那我摸索一下稳定转染，看看能不能拍出比较好的图片~...

稳转不比瞬转复杂吗，操作
赞一下 回复此楼
13楼2015-10-15 16:51:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 sherrysure 的主题更新
131/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 289求调剂 +6 步川酷紫123 2026-03-11 6/300 2026-03-17 10:23 by Sammy2
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +7 邱gl 2026-03-11 8/400 2026-03-17 09:36 by 努力学习赚彩礼
[考研] 278求调剂 +3 Yy7400 2026-03-13 3/150 2026-03-17 08:24 by laoshidan
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
[考研] 304求调剂 +5 素年祭语 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:00 by 我的船我的海
[考研] 0703化学调剂，求各位老师收留 +8 秋有木北 2026-03-14 8/400 2026-03-16 15:21 by 哦哦123
[考研] 0856求调剂 +3 刘梦微 2026-03-15 3/150 2026-03-16 10:00 by houyaoxu
[考研] 复试调剂 +4 z1z2z3879 2026-03-14 5/250 2026-03-14 16:30 by JourneyLucky
[基金申请] 有必要更换申报口吗 20+3 fannyamoy 2026-03-11 3/150 2026-03-14 00:52 by zhanghaozhu
[考研] 材料工程,326分，求调剂 +6 KRSLSR 2026-03-10 6/300 2026-03-13 23:47 by JourneyLucky
[考研] 341求调剂 +4 番茄头--- 2026-03-10 4/200 2026-03-13 23:12 by JourneyLucky
[考研] 341求调剂 +3 番茄头--- 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:07 by JourneyLucky
[考研] 337一志愿华南理工0805材料求调剂 +7 mysdl 2026-03-11 9/450 2026-03-13 22:43 by JourneyLucky
[考研] 材料工程调剂 +9 咪咪空空 2026-03-12 9/450 2026-03-13 22:05 by 星空星月
[考研] 26调剂/材料科学与工程/总分295/求收留 +9 2026调剂侠 2026-03-12 9/450 2026-03-13 20:46 by 18595523086
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:41 by JourneyLucky
[考研] 290求调剂 +7 ADT 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:17 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:30 by 求调剂zz
[考研] 化工学硕306求调剂 +9 42838695 2026-03-12 9/450 2026-03-13 10:16 by houyaoxu
[考研] 290求调剂 +3 柯淮然 2026-03-10 8/400 2026-03-11 13:48 by 柯淮然
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭