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重组质粒转染后绿色荧光表达的很奇怪，附图，求大神解释~~感激不尽
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重组质粒转染后绿色荧光表达的很奇怪， 和文献与别人做的差别很大， 我的荧光图都看不懂细胞形态，就是稀稀拉拉的云雾状，不知道是什么原因。 附图如下，求大神解释~~感激不尽 我用的载体是pEGFP-C2   20倍-8y-bl-木虫求助.jpg  40倍-10y-木虫求助.jpg  20倍-9p-木虫求助-明场.jpg  20倍-9y-木虫求助-明场对应.jpg  空载对照.JPG [ Last edited by sherrysure on 2013-9-5 at 14:52 ] |
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 细胞生物学实验经验 |
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-09-06 13:16:37
sherrysure: 金币+5, 谢谢！ 2013-09-06 16:28:10
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| 1.文章里的图一般都是拍了几张甚至几十张里挑最佳视野的结果。而且一般都修过。你适当减低曝光时间，会更清晰些。2.转染过程对细胞膜是有损伤的，有时损伤很大。这导致细胞形态改变很正常。特别是瞬时转染24h后就观察的有时细胞还没恢复。细胞传个代要贴壁也得几个小时吧。所以转染遇到这情况很正常。如果表达几天内稳定，可以适当让细胞恢复一下（推测）3.膜蛋白的过表达可能影响细胞形态。毕竟膜表面的粘附可能会受到影响。4.空载体对照和你的基因的区别不明显。分不清细胞质和细胞膜表达。你把曝光时间调小，让光弱些，换40倍镜试试.调焦再细心些。照片荧光不要太亮了，导致周围都有些绿色了（空载体明显）。5.建议使用染料染细胞膜。这样能使结果更清晰准确。6.有条件的可以试试激光共聚焦显微镜，会清晰很多（调焦要耐心。）总之，转进去了，表达了，现在只是拍照和处理图片的问题，别太担心。很可能转入这个基因就是这样的。 |
10楼2013-09-05 15:25:08
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