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kaka1045

铜虫 (小有名气)

[求助] 大肠杆菌破壁时为什么要加入buffer

破壁时要用冰浴?如果细胞破碎仪带有冷冻功能是不是就不用冰浴了?破壁时加入buffer的作用是什么?一般buffer是指什么物质?
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zhangbighui

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
破壁时冰浴是防止蛋白变性沉淀或起泡沫外溢。带有冷冻功能也需要冰浴,超声破碎时温度会升高。buffer起PH缓冲作用,buffer主要为缓冲盐类加一些咪唑或是尿素。
成功,就是成为你想成为的人
2楼2013-09-03 10:27:08
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kaka1045

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhangbighui at 2013-09-03 10:27:08
破壁时冰浴是防止蛋白变性沉淀或起泡沫外溢。带有冷冻功能也需要冰浴,超声破碎时温度会升高。buffer起PH缓冲作用,buffer主要为缓冲盐类加一些咪唑或是尿素。

是说大肠里面会有一些酸性活碱性物质?破壁后会使蛋白变性吗?
3楼2013-09-03 10:30:46
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wmwnyxt

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kaka1045: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢 2013-09-03 13:12:13
因为超生破碎时,温度较高,防止细胞内蛋白质、酶的变性或是胞内代谢产物分解。
buffer指的是缓冲盐,一般可以选择Tris-HCl或PBS。
用其目的自语菌体细胞中的很多时酶类等蛋白类物质,需要在一定的盐离子浓度,一定的pH范围内才稳定,
因此若想得到胞内的活性物质,一般加入缓冲液。
Ifyouwanttocatchupwiththepaceoflife,youshouldfullfillyourselfatfirst
4楼2013-09-03 11:07:29
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