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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 大肠杆菌破壁时为什么要加入buffer
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kaka1045

铜虫 (小有名气)

[求助] 大肠杆菌破壁时为什么要加入buffer

破壁时要用冰浴？如果细胞破碎仪带有冷冻功能是不是就不用冰浴了？破壁时加入buffer的作用是什么？一般buffer是指什么物质?
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1楼 2013-09-03 09:21:55
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zhangbighui

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
破壁时冰浴是防止蛋白变性沉淀或起泡沫外溢。带有冷冻功能也需要冰浴，超声破碎时温度会升高。buffer起PH缓冲作用，buffer主要为缓冲盐类加一些咪唑或是尿素。
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成功，就是成为你想成为的人
2楼2013-09-03 10:27:08
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kaka1045

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhangbighui at 2013-09-03 10:27:08
破壁时冰浴是防止蛋白变性沉淀或起泡沫外溢。带有冷冻功能也需要冰浴，超声破碎时温度会升高。buffer起PH缓冲作用，buffer主要为缓冲盐类加一些咪唑或是尿素。

是说大肠里面会有一些酸性活碱性物质？破壁后会使蛋白变性吗？
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3楼2013-09-03 10:30:46
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wmwnyxt

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kaka1045: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢 2013-09-03 13:12:13
因为超生破碎时，温度较高，防止细胞内蛋白质、酶的变性或是胞内代谢产物分解。
buffer指的是缓冲盐，一般可以选择Tris-HCl或PBS。
用其目的自语菌体细胞中的很多时酶类等蛋白类物质，需要在一定的盐离子浓度，一定的pH范围内才稳定，
因此若想得到胞内的活性物质，一般加入缓冲液。
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Ifyouwanttocatchupwiththepaceoflife,youshouldfullfillyourselfatfirst
4楼2013-09-03 11:07:29
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