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hywei1900

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by ZYXQCH at 2007-11-18 19:01:
谢谢大家,流动相我用的是乙腈和纯水,为5:5,所测样品为阿斯匹林和扑热息痛,贝诺脂,方法很好建立,就是总分叉。样品均用甲醇稀释。还有一个问题就是我的进样通道总往外渗液体。是不是与这个有关,

这么看你的方法挺简单的,你先排除你的流动相有没有问题吧,主要是水的问题。其次不明白你说的进样通道总往外渗液体是什么意思,具体哪个地方呢?你是手动进样的吧,如果流动相没有问题,那就用流动相多洗几次进样口吧
11楼2007-11-18 21:41:51
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tanhaohan

金虫 (正式写手)

有几种可能:
进样量是不是太大了,减少进样量就可以了
再看看是不是系统污染了,包括流通池,柱子,流动相
12楼2007-11-19 08:11:25
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herly

木虫 (正式写手)

溶解对照品的溶液采用流动相试试
13楼2007-11-19 08:13:47
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azding

银虫 (小有名气)

我以前出现过这个问题,是柱头蹋陷,用十八填料填平即可,溶剂用甲醇.一般液相出问题,最好的办法是替换排查原因.
14楼2007-11-19 08:44:31
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zhanglongwei

木虫 (正式写手)

笨笨&小白

样品溶剂换为流动相试试
习惯。。。
15楼2007-11-19 09:03:55
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bioteching

金虫 (小有名气)

会不会是异构体峰,我的东西就是两个峰,是异构体
16楼2007-11-19 11:26:24
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中学生

铜虫 (小有名气)

你为什么不用流动相稀释啊?
17楼2007-11-19 12:00:16
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ZYXQCH

铜虫 (小有名气)

不是异构体,我好像是习惯了用甲醇溶解样品了,不过以前这样做都没有分过叉。和导师正在找原因呢,如果我找着原因,我一定会告诉大家的。谢谢。
18楼2007-11-21 17:35:12
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tangzh

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by ZYXQCH at 2007-11-18 19:01:
谢谢大家,流动相我用的是乙腈和纯水,为5:5,所测样品为阿斯匹林和扑热息痛,贝诺脂,方法很好建立,就是总分叉。样品均用甲醇稀释。还有一个问题就是我的进样通道总往外渗液体。是不是与这个有关,

看样子是进样阀出问题了
19楼2007-11-22 19:26:06
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kenshin520

木虫 (著名写手)

拉风家族族长

色谱双峰(或分叉)产生的可能及判断和处理
HPLC分析中,在色谱柱正常,样品灵敏度足够,分析方法合适,色谱峰在出峰时间较短的条件下(不包括梯度),峰型应对称而尖锐。但是,在对样品了解程度不够,方法不妥,样品处理方法及进样方式不合理下,会出现各种意想不到的问题,而对色谱峰难以作出合理的解释,尤其对于新手更是如此。下面根据本人几年工作的体会,提出一些看法,向同仁指教。
色谱双峰指的是明是一种物质,但在色谱图中出现双峰,而表明含二种物质。我将这种情况分为四种原因。
1 色谱柱 如果你分析样品时发现每个色谱峰都双峰出现(出峰越快,双峰的可能性会减少),尤其采用单一纯物质时,可以肯定色谱柱出问题-柱头受损或柱头固定相变脏或流失。如果进样量少,原来色谱柱正常,色谱峰的形状多为一大峰带一小峰,不一定拖尾,这一般应是柱头受堵,将色谱柱反过来接,用流动相冲洗或酸洗或其它溶剂,将堵在柱头的残留物冲掉,再反过来,一般情况下就行了。当然不反冲,正冲有时也会正常的。如果峰拖尾,双峰强弱相差不大,柱头固定相变脏或流失可能性更大,这是可以将进样那头拧开,将微孔滤片超声,柱头刮去一部分填料,重新填上新填料拧紧,不过这种活,需要一定技术,同时不能老干那种事,否则用不了几次,色谱柱就会应柱效很低而报废。
2 溶剂极性及进样量 许多HPLC分析者对此可能不以为然,一般的HPLC的书籍和文献都不会提到这方面的内容,而这确是双峰产生的一个很重要的原因。目前HPLC分析多为反相色谱,流动相多为甲醇、乙腈、水,加各种添加剂以改善分离性能。样品一般用与流动相相溶的溶剂溶解。最佳的溶解方法是用流动相溶解,但是很多情况是不一致的。当用溶剂极性强度大的试剂,如纯甲醇、纯乙腈,纯乙醇,而分析体系中以水为主,样品进样量大,如定量管为20ul,此条件下完全可以肯定,单一的纯物质出双峰,第二峰比第一峰小(每次都不太一样),且拖尾,保留时间会提前(相对进样量少而言),将进样量减少一半以上,峰型将变为正常。这是样品的溶剂与流动相极性相差太大,而流动相来不及将其稀释达到平衡造成的。上面提到进样量造成双峰的一个原因,另一个原因是,进样量不一定大,但绝对量很大,色谱图上的双峰紧靠在一起,基本上齐高,不拖尾(如果出峰很快,也可能是色谱柱问题)。将样品稀释再进样就可以了,这是由于进样量过大,色谱柱过载造成的。
3 样品的特性 有些样品由于其化学结构的特点,存在互变异构现象,而这种互变异构体无法分开,而是以一个动态平衡存在。在色谱分析时,在一个特定的条件下,一种物质将出现双峰,双峰靠的很近,基本齐高,不拖尾,条件稍一变化,尤其pH,双峰现象将消失,如红霉素等。有的样品紫外的色谱图上看不到双峰,但在LC-MS下,用质谱检测器,其质谱的总离子流图上较明显,例如我分析过的农药啶虫眯(吡虫清)。
4 参数 记录的参数一般都内定的,不必修改,但GC和HPLC的参数是不完全一致的,例如C-R3A数据记录仪上的一般记录时间间隔GC为2ms,HPLC 为5ms,如果记录间隔时间缩短,一个峰将变为二个峰或更多。
吟(淫)得一首(手)好诗(湿)容易,难的是吟(淫)得一辈子(被子)好诗(湿)
20楼2007-11-23 10:54:54
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